目的：建立应用pH梯度分离的高通量、平台化高效液相阳离子交换色谱法，用于单克隆抗体电荷异质性分析。方法：利用不同pH的三羟甲基氨基甲烷、咪唑、哌嗪缓冲液组成pH梯度进行梯度洗脱，采用相同色谱柱、流动相和分离梯度对不同等电点的单抗进行分离。结果：用该法对美国药典收录的3种单抗-贝伐珠单抗、曲妥珠单抗、利妥昔单抗进行检测，并与对应各论中记载的盐梯度方法比较，结果显示3种单抗主峰与酸区、碱区的分离度均有改善，贝伐珠单抗分离度分别提高了44%和500%；曲妥珠单抗分离度分别提高了83%和233%；利妥昔单抗酸区分离度由无法给出提高到0.7，碱区分离度提高了10%。针对贝伐珠单抗的方法进行再次优化（提高40%通量）并开展方法学验证。结果显示方法专属性良好，高温破坏后可观察到酸区和碱区杂质均有趋势性增加；精密度良好，重复性实验中主峰保留时间RSD为0.12%，中间精密度实验中酸区、主峰、碱区百分比峰面积RSD均小于2%；准确度良好，酸区、主峰、碱区在5个不同的浓度级别中回收率总体平均值分别为100.4%，101.0%，101.4%；线性良好，蛋白含量0.8~1.2 mg·mL^-1范围内酸区、主峰、碱区峰面积均与样品浓度呈线性关系，主峰与碱区线性相关系数R²均大于0.999，酸区R²为0.988；耐用性良好，检测条件发生一定变化时，酸区、碱区和主峰的百分比峰面积测定RSD均小于3%。结论：建立的平台化pH梯度方法适用于不同单抗的电荷异质性分析，且具有良好的分离度，为单抗的研究和开发提供了一种通量更高的分离手段和分析方法。