目的：建立门冬氨酸钾镁注射液中门冬氨酸有关物质含量测定的HPLC方法。方法：采用SPHERISORB NH₂柱（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相为乙腈-0.05 mol·L^-1的磷酸二氢钾（60：40）；流速为1.0 mL·min^-1；检测波长为210 nm；柱温为30℃，进样量为5μL；对最大单个杂质采用在线二维脱盐HPLC与MS联用进行初步推断。结果：在该选定色谱条件下，主峰与有关物质峰分离度良好；门冬氨酸在0.338 64~3.386 4 mg·mL^-1浓度范围内线性关系良好（r=0.999 8）；平均回收率为99.6%（n=9），检测限为23.5 ng；初步推断最大单个杂质为富马酸。结论：本方法专属、灵敏、简便，可用于测定门冬氨酸钾镁注射液中门冬氨酸含量和有关物质。