目的：建立一种供试品处理简单的银杏叶总黄酮醇苷含量测定方法。方法：采用单因素试验，考察溶剂量、提取时间、提取温度的影响，以总黄酮醇苷含量为评价指标，筛选最佳提取方法，并对该方法进行方法学考察及验证。结果：溶剂量80 mL，提取时间45 min，回流温度90℃为最佳实验条件；槲皮素、山柰酚、异鼠李素分别在0.158~15.78 μg、0.109~10.87 μg、0.019~1.944 μg范围内呈良好的线性关系（r≥0.999 0）；槲皮素、山柰酚、异鼠李素的平均加样回收率分别为95.4%、93.8%、92.0%，符合限度要求，该方法加样回收率良好（RSD均<3%）；15批银杏叶验证结果与《中华人民共和国药典》（以下简称中国药典）2015年版方法测定结果不具有显著差异［相对平均偏差（relative average deviation，RAD）均<3%］。结论：本试验建立的方法准确可行，操作简便，较中国药典方法效率高，有助于实时监测银杏叶质量，且该方法节省时间和溶剂，减少了资源浪费和环境污染，同时也为2020年版中国药典修订提供参考依据。