目的：本文以异株五加甲苷为指标成分，对黑种草子定性定量方法进行改进研究。方法：采用改进后的TLC法和HPLC-ELSD法定性鉴别和定量测定异株五加甲苷。以硅胶HSG为薄层板，正丁醇-水-醋酸（2.5∶1∶0.5）为展开剂，10%硫酸乙醇试剂显色后在日光下检视，进行TLC定性分析。采用C₁₈色谱柱，以乙腈-乙酸铵系统为流动相进行梯度洗脱，ELSD为检测器，建立HPLC定量分析方法。同时按照2015年版《中华人民共和国药典》（以下简称中国药典）中质量控制方法对黑种草子药材进行处理，其结果与新建立的质量评价方法进行对比及相关性研究。结果：所建立的TLC方法斑点丰富、清晰、分离度好。异株五加甲苷在0.023~3.022 mg·mL^-1范围内线性关系良好（r=0.999 6），平均加样回收率（50%、100%、150%）分别为98.8%（RSD=1.8%）、101.4%（RSD=1.0%）及100.8%（RSD=1.9%），方法的精密度、重复性和稳定性试验RSD小于2.2%，HPLC-ELSD法定量异株五加甲苷方法学满足分析测定要求。16批样品分别采用新建与2015年版中国药典收载的方法进行含量测定，相关系数为0.952，判定结果一致。结论：新方法操作简便、省时、专属性高，并能提高检验效率、降低检测成本，为黑种草子质量标准的提升提供了依据。