目的：建立液相色谱-串联质谱法测定犬血浆中丁苯酞的浓度。方法：6只Beagle犬，单剂量灌胃丁苯酞（20 mg·kg^-1），犬血浆样本以乙腈沉淀蛋白后，选用Agilent Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（2.1 mm×50 mm，2.7 μm），流动相为水-乙腈（65∶35），流速0.4 mL·min^-1，柱温40℃，进样量5 μL，分析时间4.5 min；选用Agilent 6460三重四极杆串联质谱仪，离子化方式：电喷雾-正离子（API-ES），干燥气为N₂，干燥气流速11 L·min^-1，干燥气压力0.31 MPa，干燥气温度350℃，毛细管电压4 kV。监测方式为MRM，丁苯酞监测离子对m/z 191.0/144.9，地西泮监测离子对m/z 285.1/193.1。结果：本分析方法专属性良好；丁苯酞质量浓度在2~2 000 ng·mL^-1范围内线性关系符合要求；准确度均在85%~115%，精密度RSD在15%内。主要药代动学参数：T_max为（0.52±0.09） h，C_max为（1 625±273）μg·L^-1，AUC_{（0-24 h）}为（5 076±751）μg·L^-1·h^-1，t_1/2为（1.26±0.11） h。结论：本法适用于犬血浆中丁苯酞浓度的测定，可用于丁苯酞犬体内药代动力学研究。