目的：着重探讨采用新技术检测川贝母的真伪。方法：本研究利用多重连接探针扩增（MLPA）技术特异、敏感等技术优势，以川贝母、平贝母、伊贝母、浙贝母和湖北贝母为研究对象，针对川贝母及非川贝母ITS1序列设计了10条特异探针，建立川贝母掺伪检测及相对定量的MLPA扩增方法。结果：针对探针混合物分别以川贝母及4种非川贝母对照药材为模板，从单个样品中只能扩增出单一扩增峰，表明了探针高特异性。敏感性分析结果表明，MLPA扩增最低检测限度可达到掺伪10%，并且目的扩增峰面积比与掺伪比例基本一致。检测市场抽查样品验证了MLPA扩增方法在川贝母掺伪检测中的适用性，表明该方法可有效检出川贝母药材掺伪，并可反映市场药材掺伪比例。结论：本研究基于MLPA建立的川贝母掺伪检测方法，具有特异性强及敏感性高的特点，可为川贝母药材检验监管提供技术支持，为中药材掺伪检测技术的建立提供参考。