目的：建立重组人溶菌酶含量及纯度的反相高效液相色谱（RP-HPLC）检测方法。方法：采用Welch Ultimate XB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），含0.1%三氟乙酸和0.9%氯化钠的水溶液为流动相A；含0.1%三氟乙酸和0.9%氯化钠水溶液-乙腈（40：60）为流动相B；检测波长280 nm，柱温32℃，流速1.0 mL·min^-1，线性梯度洗脱。结果：本方法专属性良好；供试品48 h内稳定，RSD为0.51%；重复性RSD为0.46%，中间精密度不同工作日间的RSD为0.52%，不同实验员间的RSD为0.53%；定量下限200 ng、检测下限30 ng；在进样量10~60 μg范围内，线性关系良好，r=0.999 9；平均回收率（n=9）99.7%，RSD为0.94%。测定3批重组人溶菌酶冻干粉含量分别为36.5%、32.8%和31.1%；纯度均大于98%。结论：方法学验证表明，该方法符合定量检测重组人溶菌酶含量和纯度的要求，适用于重组人溶菌酶的质量控制。