目的：比较不同产地铁皮石斛功能性多糖结构特征，为其质量控制奠定基础。方法：高效凝胶色谱联用多角度激光散射和示差折光仪法（HPSEC-MALLS-RID法）用于测定多糖的重均相对分子质量、回旋半径及含量，色谱柱为TSK-GEL G5000 PW_XL串联TSK Gel G3000PW_XL，柱温35℃，流动相为9 mg·mL^-1氯化钠水溶液，流速0.5 mL·min^-1。气相色谱联用质谱法用于分析单糖组成及糖苷键，毛细管色谱柱为Agilent HP-5MS（30 m×0.25 mm×0.25 μm），进样量2 μL，用于单糖组成分析的程序升温条件为起始温度165℃，保持7 min，以5℃·min^-1升温至185℃，保持5 min，以4℃·min^-1升温至200℃，以20℃·min^-1升至280℃；用于糖苷键分析的程序升温条件为起始温度120℃，以5℃·min^-1升温至200℃，以8℃·min^-1升温至250℃，以20℃·min^-1升至280℃。基于荧光辅助凝胶电泳、高效薄层色谱-糖谱法分析功能性多糖部分酸水解和酶解产物特征，荧光辅助凝胶电泳采用200 V分离10 min，再调整电压至700 V分离40 min，凝胶在UV 365 nm下成像；TLC展开剂为正丁醇-异丙醇-水-醋酸（7：5：2：1），显色剂为苯胺-二苯胺。结果：不同产地铁皮石斛多糖重均相对分子质量、回旋半径和含量分别为0.533×10⁵~4.575×10⁵、19.8~71.7 nm和6.28%~28.72%；铁皮石斛功能性多糖的单糖组成主要为（乙酰）甘露糖和葡萄糖，摩尔比（3.86~6.99）：1.00，糖苷键类型主要为1，4-Manp和1，4-Glcp，摩尔比（4.51~7.89）：1.00；不同铁皮石斛多糖的部分酸水解和酶解产物糖谱特征相似。结论：不同产地铁皮石斛功能性多糖结构具有较高的一致性，功能性多糖是铁皮石斛较好的质量控制指标。