目的：筛选生物酶辅助提取巴戟天多糖及耐斯糖的最佳水提工艺。方法：在单因素试验基础上，采用二次通用旋转组合设计优化工艺。测定多糖含量采用硫酸比色法，对照品为0.1 mg·mL^-1无水葡萄糖标准溶液，显色剂为5%苯酚溶液，489 nm波长处紫外分光光度仪下测定吸收度。测定耐斯糖含量采用高效液相色谱法，色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C₁₈（5 μm，4.6 mm×150 mm），流动相为甲醇-水（3：97），流速为0.8 mL·min^-1，漂移管及雾化温度为40和80℃。结果：生物酶辅助提取巴戟天多糖及耐斯糖的最佳水提工艺为：pH 5.0、加入0.18%的纤维素酶，55℃酶解2.0 h，20倍量水提取3.5 h，提取3次，巴戟天多糖得率为10.44%，耐斯糖得率为0.083 g·g^-1。结论：二次通用旋转组合设计所得的优化工艺可靠、稳定，对巴戟天的开发利用具有一定意义。