目的: 采用SIM 模式,建立一种快速、灵敏的GC-MS 衍生化方法测定大鼠血浆中5-雄烯二醇。方法: 以脱氢表雄甾酮-2,2,3,4,4,6-d6(DHEA-d₆)为内标,血浆样品经过甲基叔丁基醚(MTBE)提取,离心,取上清液氮气吹干,通过BSTFA-TMCS(99:1)衍生化后进行GC-MS 分析。RESTEK 色谱柱:Rxi-5 ms(30 m×0.25 μm×0.25 mm);程序升温:初始温度为60 ℃,维持1 min,以40 ℃·min^-1 速率升至220℃,再以5 ℃·min^-1 的速率升至300 ℃,维持5 min;采用选择离子扫描模式(SIM),5-雄烯二醇的定性离子为m/z 434、344,定量离子为m/z 344,DHEA-d₆ 的定性离子为m/z 366、276,定量离子为m/z 276。结果: 血浆中5-雄烯二醇质量浓度在80~5 000 ng·mL^-1 范围内线性关系良好(r²=0.999 3);低、中、高3 个浓度的准确度在70%~103% 之间;日内、日间精密度均小于5%;提取回收率(n=4)在75.96%~104.01%;低、高2 个浓度的血浆样品在室温放置12 h,4 ℃冰箱中放置24 h,-20 ℃保存30 d、反复冻融4 次,以及衍生化后的样品室温放置4、8、12、24 h 均能保持稳定。大鼠皮下注射5-雄烯二醇混悬液的药-时曲线符合二室模型,其药代学参数为T1/2 为(26.45±8.40)h,AUC_(0-t)为(2 887.46±1 033.70)μg·h^-1·L^-1。结论: 本方法经方法学验证,可作为大鼠血浆中5-雄烯二醇含量的测定方法,适合药动学研究。