目的: 建立一种测定Caco-2 细胞中斯皮诺素的超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)检测方法,研究斯皮诺素在Caco-2 细胞中的转运方式。方法: 采用BEH C₁₈ 色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.7μm),流动相为水-甲醇溶液,梯度洗脱,流速0.30 mL·min^-1;质谱测定采用电喷雾离子源,负离子模式,多反应监测(MRM)定量离子对m/z 607→427,以Caco-2 细胞模型研究斯皮诺素的双向转运,考察斯皮诺素浓度及P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)抑制剂对斯皮诺素转运的影响。运用UPLC-MS/MS 检测药物浓度,计算其表观渗透系数。结果: UPLC-MS/MS 检测斯皮诺素具有良好的线性(r²>0.999 0)、精密度的RSD ≤ 15%,准确度在88%~115% 之间,绝对回收率均在80% 以上,斯皮诺素最低检测限为2 ng·mL^-1。斯皮诺素在Caco-2 细胞中,其转运方向主要是从绒毛面(AP)→基底面(BL),且与浓度相关。斯皮诺素质量浓度在2~40 μg·mL^-1 时,其表观渗透系数P_app(AP→BL)随浓度的增加而增加,外排率低于0.2,显示被动转运,但在80 μg·mL^-1 时,其外排率为2.84,大于2,显示有P-gp 参与外排;加入P-gp 抑制剂后,其外排率显著降低。结论: 在低浓度时,斯皮诺素在Caco-2 细胞中的转运以被动扩散为主,但在高浓度时,受到P-gp 糖蛋白的外排作用,吸收降低。