目的：建立一种新的、稳定的微乳体系，并应用微乳液相色谱法同时测定白术药材中白术内酯Ⅰ、Ⅲ的含量。方法：考察影响分离的主要因素：表面活性剂、助表面活性剂、油相、pH、温度、色谱柱等，得到微乳体系为3.3%（w/v）十二烷基硫酸钠-8.25%（v/v）正丁醇-1.15%（v/v）正辛烷，色谱柱为Welch MaterialsXB-C₈（4.6 mm×200 mm，30 μm），流速为1 mL·min^-1，检测波长为220 nm，柱温为20℃。结果：白术内酯Ⅰ、Ⅲ在18 min内达到基线分离，白术内酯Ⅰ的线性范围为2.50～20.1 μg·mL^-1（r²=0.999 2），平均回收率（n=5）为97.89%（RSD=2.42%）；白术内酯Ⅲ的线性范围为3.15～25.2 μg·mL^-1（r²=0.999 3），平均回收率（n=5）为98.61%（RSD=2.19%）；检出限（LOD）分别为1.15、1.36 ng。对5个产地白术药材进行含量测定，得白术内酯Ⅰ的含量范围为0.106～0.217 mg·g^-1，白术内酯Ⅲ的含量范围为0.169～0.389 mg·g^-1。通过优化最终微乳流动相的有机试剂（SDS、正丁醇、正辛烷）含量仅为12.7%。结论：经方法学验证，本法可用于白术药材中白术内酯Ⅰ、Ⅲ的质量分析。与传统HPLC法相比，MELC法采用微乳为流动相，既节约了有机试剂的用量，又减少了有机试剂的排放，具有绿色、经济的优点。