目的：建立柴胡桂枝汤的HPLC指纹图谱分析方法，为研究柴胡桂枝汤的药效物质基础及质量控制提供科学依据。方法：采用Inertsil ODS-SP C₁₈色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），柱温25℃以0.1%甲酸水溶液-0.1%甲酸甲醇溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.6 mL·min^-1，检测波长275 nm。采用“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版”对12批柴胡桂枝汤HPLC指纹图谱进行评价，并且通过对照品比对及高效液相与质谱联用技术（HPLC-MS）对主要共有峰进行指认。结果：12批柴胡桂枝汤指纹图谱中有21个共有峰，各峰分离度良好，样品间相似度均>0.99，共指认出14个峰。结论：建立的指纹图谱方法具有良好的精密度、重复性、稳定性，各共有峰间分离度高，可为柴胡桂枝汤物质基础和质量控制研究提供参考。