目的：建立高效液相色谱法同时测定炮山甲中3个成分L-丝-L-酪氨酸环二肽、D-丝-L-酪氨酸环二肽、L-甘-L-酪氨酸环二肽的含量。方法：采用赛分Sepax Bio-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5μm），以0.1%TFA乙腈-0.1%TFA水（2：98）为流动相，流速1.0 mL·min^-1，检测波长210 nm。并以3种环二肽为指标，使用SPSS 22.0软件对40批样品进行聚类分析。结果：3个环二肽分离良好，L-丝-L-酪氨酸环二肽、D-丝-L-酪氨酸环二肽、L-甘-L-酪氨酸环二肽进样量分别在0.056~2.244μg（r=0.9999）、0.061~2.452μg（r=0.9997）、0.059~2.348μg（r=0.9999）范围内呈良好的线性关系。加样回收率分别为101.8%、98.1%、95.7%，相应的RSD分别为0.76%、2.2%、2.6%；40批样品中3个成分的含量范围分别为0.0070%~0.23%，0.0050%~0.14%，0.0080%~0.18%，盐类增重对环二肽含量有显著影响，聚类分析将其分为3类。结论：本方法准确可靠，适用于炮山甲中环二肽成分的含量测定。