目的：建立高效液相色谱-荧光检测法（HPLC-FLD）测定肿瘤耐药细胞中罗丹明123（Rho 123）的浓度，并采用建立的检测方法考察欧前胡素对Rho 123含量的影响。方法：用乙腈沉淀法进行蛋白沉淀。色谱柱为Phenomenex-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm），柱温为40℃，流动相为乙腈-1%三乙胺（磷酸调至pH为3.0）（28∶72），流速为1 mL·min^-1，激发波长485 nm，发射波长546 nm，进样量为20 μL。结果：Rho 123标准曲线为Y=1.199 3X-4.003 6（R²=0.999 7），其质量浓度在9.375~600 ng·mL^-1范围内线性良好，定量下限为1.172 ng·mL^-1，日内与日间精密度均小于10%，绝对回收率为70.6%~80.6%，相对回收率为91.0%~106.7%，长期、短期以及反复冻融稳定性良好。2、5、10 μg·mL^-1欧前胡素组的A2780/Taxol与K562/ADR细胞内的蓄积倍数分别为2.79、3.53、4.18与2.18、2.36、2.39。结论：本方法专属性强，灵敏度高，简单可靠，适用于检测肿瘤耐药细胞悬液中Rho 123的浓度，可用于细胞中P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的活性和功能评价。欧前胡素对肿瘤耐药细胞中P-gp介导的Rho 123外排具有抑制作用。