目的：建立伯克霍尔德菌属典型菌株DNA促旋酶亚基B（gyrB）基因序列鉴定方法，为该菌属污染物的鉴定和分类提供研究思路和方法依据。方法：选择伯克霍尔德菌属内的典型菌株，以gyrB基因为研究靶点，设计引物，特异性扩增gyrB基因片段，测定核酸序列，并进行聚类比对分析。结果：伯克霍尔德菌属内的典型菌株鉴定的gyrB基因特征序列可满足"种"水平的鉴定。结论：本文建立了基于gyrB基因的伯克霍尔德菌属核酸测序鉴定方法，菌株鉴定的gyrB基因特征序列可满足"种"水平的鉴定，为该菌属污染物的鉴定与风险排查提供方法依据。