目的：利用高效液相色谱法建立紫斑牡丹花粉的特征图谱，并测定不同产地紫斑牡丹花粉中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、槲皮素4个成分的含量。方法：采用CAPCELL PAK-C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈（A）-0.2%甲酸水（B）为流动相梯度洗脱，流速1 mL·min^-1，检测波长274 nm，柱温30℃；采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件（2012年版）对13批牡丹花粉进行相似度分析，同时测定7批不同产地牡丹花粉中4个成分的含量。结果：13批紫斑牡丹花粉样品得到的指纹图谱相似度大于0.960，标定共有峰16个，并确定了其中4个色谱峰的归属。产自甘肃兰州、安徽亳州、山东菏泽的7批紫斑牡丹花粉样品中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、槲皮素的含量分别在2.488~7.675、0~15.251、2.339~10.433、6.462~15.924 mg·g^-1之间。结论：HPLC指纹图谱结合定量测定能全面反映紫斑牡丹花粉内在质量，该方法简便可行，快速准确，可为其质量评价提供参考。