目的：建立三七药酒HPLC指纹图谱，为三七药酒质量评价提供检测方法。方法：采用HPLC方法建立三七药酒的指纹图谱。采用Welch Ultimate XB-C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5-Micron），以乙腈（A）-0.05%乙酸溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~24 min，14% A→20% A；24~40 min，20% A→45% A；40~50 min，45% A→55% A；50~70 min，55% A→65% A；70~75 min，65% A→90% A；75~90 min，90% A），流速1 mL·min^-1，检测波长240 nm，柱温25℃。运用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"对不同季节生产的21个批次的三七药酒进行相似度评价；采用LC-MS对共有峰进行鉴定。结果：建立了三七药酒HPLC指纹图谱，标定了18个共有峰，并结合LC-MS结果，确定了13个峰对应的化合物：原巴西苏木素B、阿魏酸、淫羊藿苷、补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂定、藁本内酯、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂酚、11-羰基-β-乙酰乳香酸。21批样品相似度在0.994~0.999之间。结论：本文建立的三七药酒指纹图谱对三七药酒质量评价具有指导意义。