目的：联合使用UPLC定时波长自动切换技术及梯度洗脱法，快速测定西红花有效成分西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ含量及鉴别柠檬黄、胭脂红、金胺O和新品红4个常见非法染色物。方法：采用UPLC定时波长自动切换技术，色谱柱为ACQUITY UPLC HSS T3柱（2.1 mm×150 mm， 1.8 μm）；流动相为乙腈-0.05 mol·L^-1乙酸铵水溶液（含0.05%乙酸），梯度洗脱，体积流量0.3 mL·min^-1；柱温35℃。结果：西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和4个非法染色物可同时检出，均达到基线分离；西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ均有较宽的线性范围和良好的线性关系（r>0.999 9），平均回收率（n=6）分别为100.1%、101.6%， 12批样品中西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ的检测含量范围分别为2.75%~9.92%、1.00%~4.28%；柠檬黄、金胺O、新品红、胭脂红的检测下限分别为0.041、0.088、0.11、0.14 ng，定量下限分别0.17、0.23、0.32、0.42 ng。结论：本方法简便快速，准确灵敏，重复性好，能在短时间内较全面地评价西红花药材的质量，有助于提高企业对原药材的检测效率。