液质联用鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体的蛋白种类
网络出版日期: 2024-05-31
Identification of proteins of recombinant human herpes simplex virus type 1 by liquid chromatography-mass spectrometry
Online published: 2024-05-31
目的: 采用液质联用技术鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体中的蛋白种类。方法: 用Triton X-100裂解病毒,用丙酮提取病毒蛋白;将病毒蛋白还原烷基化后用胰蛋白酶酶切,酶切肽段进行液质联用分析。色谱柱为C18(2.1 mm×150 mm,1.7 μm),以含0.1%甲酸的水溶液(A)-含0.1%甲酸的乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min-1。质谱仪采用正离子、高灵敏度、IDA模式采集数据,喷雾电压5.5 kV,离子源温度550℃,扫描范围m/z 200~2 000;将采集的质谱数据导入到ProteinPilot软件中进行搜库检索,肽段与蛋白的可能性大于95%时可认为鉴定,人工对匹配的串联图谱进行确证,肽段及蛋白可接受的假阳性率(FDR)不高于1%。结果: 在人单纯疱疹病毒蛋白数据库中检索,鉴定到29种人单纯疱疹病毒蛋白,大多为衣壳蛋白及包膜蛋白;在绿猴(Chlorocebus)属蛋白数据库中检索,鉴定到2种宿主细胞蛋白;在全病毒蛋白数据库中检索,鉴定到1种猫肉瘤病毒蛋白。结论: 液质联用技术具有高灵敏度、高分辨率的特点,可用于基因治疗产品的质量研究。
陶磊, 赵颖华, 于雷, 韩春梅, 李永红, 饶春明 . 液质联用鉴定重组人1型单纯疱疹病毒载体的蛋白种类[J]. 药物分析杂志, 2020 , 40(1) : 13 -19 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2020.01.02
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