目的： 为了研究大叶千斤拔根、茎的化学成分差异，首先建立大叶千斤拔根的HPLC指纹图谱，对根、茎的成分差异进行定性分析；其次，针对二者共有成分染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素建立含量测定方法，进行定量评价。方法： 采用Agilent Zorbax SB-phenyl（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以乙腈-0.5%乙酸水溶液为流动相，梯度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，检测波长260 nm；采用中药指纹图谱相似度评价系统（2.0版）进行相似度评价；对3个成分的含量测定结果，采用SPSS（16.0）软件t检验分析，确定区分根、茎的指标成分。结果： 11批根的图谱相似度为0.919~0.984，7批茎的图谱相似度为0.638~0.848；染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素3个成分的含量在根中分别为0.64~1.30、0.62~1.21、0.13~0.47 mg·g^-1，在茎中分别为0.07~0.31、0.14~1.00、0.10~0.28 mg·g^-1。结论： 大叶千斤拔根、茎的化学成分存在一定差异，染料木苷、6″-O-丙二酰染料木苷、染料木素3个成分总量可用于大叶千斤拔根的质量控制，染料木苷含量或染料木苷与染料木素的含量比值可作为区分根、茎的指标。