重组抗体药物质量分析专栏

糖基化修饰对重组CTLA4-Ig稳定性影响的研究

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  • 1. 火箭军总医院 特勤医学科, 北京 100088;2. 解放军第306医院放疗科, 北京 100101;3. 中国食品药品检定研究院 单克隆抗体产品室 卫生部生物技术产品检定方法及标准化重点实验室, 北京 102629

网络出版日期: 2024-05-31

Effect of glycosylation modification on the stability of recombinant CTLA4-Ig

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  • 1. Special Service Department, The General Hospital of the Rocket Force PLA, Beijing 100088, China;
    2. Department of Radiation Oncology, PLA No. 306 Hospital, Beijing 100101, China;
    3. Division of Monoclonal Antibody, National Institutes for Food and Drug Control, Key Laboratory of the Ministry of Health for Research on Quality and Standardization of Biotech Products, Beijing 102629, China

Online published: 2024-05-31

摘要

目的:探讨糖基化修饰对细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4抗体融合蛋白(CTLA4-Ig)融合蛋白稳定性的影响。方法:应用多种糖苷酶N-糖苷酶F(PNGase F)、内切糖苷酶F2(EndoF2)、唾液酸酶(neuraminidase)和O-糖苷酶(O-glycosidase)对样品进行处理。通过分子排阻色谱(SEC)测定不同酶切时间处理后样品纯度变化;应用差示扫描荧光(DSF)测定样品整体热力学参数的变化;应用差示扫描量热(DSC)测定样品各结构域热力学参数变化;在45℃条件下加热,分别于0、1、3、5、7、9、11和12周取样,通过SEC测定样品纯度的变化。结果:N-糖苷酶F、内切糖苷酶F2和唾液酸酶分别处理过程中,CTLA4-Ig的聚体含量逐渐增加,而O-糖苷酶酶切过程中,聚体虽无明显变化,但碎片含量逐渐增加;经DSF测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后解链温度(Tm)均明显下降,而唾液酸酶和O-糖苷酶处理后Tm无明显变化;经DSC测定,N-糖苷酶F和内切糖苷酶F2处理后Tm1下降,Tm2不变,Tm3上升,而唾液酸酶处理后Tm1和Tm3都略微有所上升,Tm2基本不变,O-糖苷酶处理后Tm值均变化;加速试验过程中,N-糖苷酶F和唾液酸酶处理样品的聚体上升,内切糖苷酶F2处理样品的的聚体不变;O-糖苷酶处理样品的的聚体不变,而碎片偏高。结论:通过多种分析手段研究发现,糖基化修饰与CTLA4-Ig的稳定性密切相关。

本文引用格式

朱磊, 单改仙, 王兰 . 糖基化修饰对重组CTLA4-Ig稳定性影响的研究[J]. 药物分析杂志, 2019 , 39(1) : 70 -77 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2019.01.09

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