目的：采用高效液相色谱法建立酒苁蓉的特征图谱，并同时测定5个苯乙醇苷类成分的含量。方法：以松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖苷和2'-乙酰基毛蕊花糖苷为对照，采用Agilent EclipseXDB-C₁₈（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，以甲醇为流动相A，0.1%甲酸为流动相B，梯度洗脱（0~15min，15% A → 21% A；15~20 min，21% A → 25% A；20~70 min，25% A → 43% A），流速1.0 mL·min^-1，检测波长为330 nm，柱温35℃。结果：建立酒苁蓉特征图谱，70 min内酒苁蓉的主要色谱峰能够达到完全分离，同时标定5个苯乙醇苷类成分，对15批饮片中的5个成分进行含量测定。松果菊苷、肉苁蓉苷A、毛蕊花糖苷、异毛蕊花糖和2'-乙酰基毛蕊花糖苷的质量浓度分别在10.05~1 005 μg·mL^-1（r=0.999 9，n=6）、2.02~202 μg·mL^-1（r=0.999 9，n=6）、2.04~204 μg·mL^-1（r=0.999 9，n=6）、2.01~201 μg·mL^-1（r=0.999 9，n=6）、2.02~202 μg·mL^-1（r=0.999 9，n=6）范围内线性关系良好，方法的平均回收率（n=6）分别为99.8%（RSD=0.30%）、99.5%（RSD=1.6%）、100.2%（RSD=0.44%）、99.5%（RSD=0.53%）、99.8%（RSD=0.36%）；15批酒苁蓉中上述5个成分含量分别为0.20%~7.38%、0.03%~0.20%、0.03%~0.72%、0.03%~0.75%、0.03%~0.07%。结论：该方法操作简单，重复性好，并能同时测定5个苯乙醇苷类成分含量，具备定性定量双重作用，可为酒苁蓉的质量标准研究提供更加全面的依据。