目的：建立UHPLC-MS/MS法同时检测六合氨基酸注射液中6个有效成分（L-精氨酸、L-谷氨酸、L-门冬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-缬氨酸）的含量。方法：采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈（3.0mm×150 mm，5 μm）色谱柱分离，以含0.2%甲酸和0.02%七氟丁酸的甲醇溶液-含0.2%甲酸和0.02%七氟丁酸的水溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.4 mL·min^-1，柱温50℃；以电喷雾离子源（ESI），正离子扫描方式，多反应监测扫描模式进行定量分析。结果：所测6个氨基酸浓度在一定范围内呈良好的线性关系，r>0.999 3；实验精密度、稳定性、重复性良好；平均加样回收率为95.8%~103.2%，RSD<4.2%。10批样品中L-精氨酸、L-谷氨酸、L-门冬氨酸、L-亮氨酸、L-异亮氨酸和L-缬氨酸的含量检测结果分别为21.64~22.24、18.12~18.64、3.84~4.24、16.40~16.88、10.76~11.48和11.96~12.48 mg·mL^-1。结论：经方法学验证，所建立的分析方法简便、快速、准确，灵敏度高，可作为六合氨基酸注射液的质量控制和评价方法。