活性分析·生物检定

重组人乙酰胆碱酯酶体外表达制备及其相关小分子活性筛选

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  • 浙江农林大学, 林业与生物技术学院中药学科, 杭州 311300

网络出版日期: 2024-05-31

Expression and preparation of recombinant human acetylcholinesterase in vitro and screening of micromolecule for anti-AchE activity

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  • Institute of Traditional Chinese Medicine, School of Forestry and Biotechnology, Zhejiang A & F University, Hangzhou 311300, China

Online published: 2024-05-31

摘要

目的:建立重组人乙酰胆碱酯酶(rhAChE)抑制剂体外筛选模型,并应用该模型对中药单体进行抑制剂的初步筛选。方法:运用pCMV-AChE表达质粒转染HEK293细胞,通过DEAE-Sepharose FF柱纯化酶液,获得更高纯度和活性的纯化酶,并建立其活性检测方法,同时结合SDS-PAGE及Western blot验证模型成功与否;以AChE的可逆性抑制剂多奈哌齐为阳性药,运用该模型探究小檗碱、血根碱和蛇根碱对AChE的影响。结果:纯化液比活力为15.93 U·mg-1,纯化倍数为9.63,酶活回收率为56%;Western blot结果显示在68×103 g·mol-1附近出现明显的rhAChE的单一条带;测得纯化后rhAChE的IC50为5.0 nmol·L-1,明显低于纯化前(14 nmol·L-1);3个不同的化合物对rhAChE分别表现出不同程度的抑制作用,其中小檗碱的IC50接近多奈哌齐。结论:SDS-PAGE、Western blot以及多奈哌齐的阳性结果显示利用pCMV-AChE转染的HEK293细胞成功构建rhAChE抑制剂体外筛选模型,并成功运用于中药单体药物的初筛。

本文引用格式

孙磊, 李照, 吴怀秀, 李晓丹, 高飞, 钱永常, 王向军 . 重组人乙酰胆碱酯酶体外表达制备及其相关小分子活性筛选[J]. 药物分析杂志, 2019 , 39(3) : 386 -392 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2019.03.02

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