目的：建立放线菌Streptomyces sp.BOR-0331发酵液中疏螺旋体素含量测定的方法。方法：采用高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱（HPLC-Q-TOF-MS）分析技术进行定性鉴别；高效液相色谱（HPLC）法进行含量测定，采用Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱（5 μm，4.6 mm×250 mm），流动相为乙腈-0.1%三氟乙酸溶液（50：50），流速为1.5 mL·min^-1，检测波长为257 nm。结果：疏螺旋体素浓度范围在12.5~200 μg·mL^-1线性良好，相关系数为0.9997（n=5）；平均回收率为102.8%（RSD为0.86%），精密度RSD为1.3%；3批发酵液中疏螺旋体素的含量分别为61.18、69.92、61.08 μg·mL^-1。结论：方法准确可靠，可以用于疏螺旋体素发酵、提炼及纯化过程的含量测定。