目的：建立指纹图谱及一测多评法测定关防风中4个化学成分含量。方法：采用Agilent ZORBAXEclipse XDB C₁₈（2）色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以甲醇（A）-水（B）为流动相，梯度洗脱（0~10min，20% A → 40% A；10~30 min，40% A → 65% A；30~40 min，65% A；40~60 min，65% A → 80% A；60~70min，80% A），流速1.0 mL·min^-1，检测波长254 nm，柱温30℃；采用高效液相色谱法测定12批关防风的指纹图谱，建立指纹图谱共有模式。以5-O-甲基维斯阿米醇苷为内参物，建立升麻素、升麻素苷、亥茅酚苷的相对校正因子，并进行含量计算，实现一测多评。同时采用外标法测定12批关防风中4个色原酮类成分的含量，比较计算值与实测值的差异，验证一测多评法的准确性。结果：12批关防风指纹图谱标定了共20个共有峰，指认了其中7个化学成分。12批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.90。建立的相对校正因子重现性良好，采用校正因子计算的含量值与实测值之间无显著差异（P>0.05）；通过聚类分析，栽培品和野生药材能有效区分。结论：所建立的方法准确、可行，可用于关防风中4个化学成分的定性定量分析。