目的：建立超高效液相色谱-质谱联用（UHPLC-MS/MS）方法，同时测定大鼠灌胃白花蛇舌草水提取物后血浆中去乙酰车叶草苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯和京尼平苷酸的含量。方法：使用C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.8 μm），以乙腈-0.1%甲酸水为流动相梯度洗脱，流速为0.3 mL·min^-1；采用质谱检测法，多反应监测（MRM）方式检测。结果：各成分线性良好，r²均≥ 0.993 4。各成分日内及日间精密度均在15%以内，准确度回收率范围为91.8%~99.0%。血浆中各待测物及内参提取回收率均≥ 94.5%。去乙酰车叶草苷酸、去乙酰车叶草苷酸甲酯及京尼平苷酸分别在灌胃后0.5、3和3 h达到最高浓度，AUC_（0-t）分别为（1 281.95±1 079.75）、（1 679.10±681.93）、（129.35±69.23）ng·L^-1·h^-1，AUC_（0-∞）分别为（1 373.21±1 054.31）、（2 018.92±1 102.21）、（152.94±71.34）ng·L^-1·h^-1，t_1/2分别为（6.50±5.95）、（8.54±4.14）、（5.22±2.11）h，MRT_（0-t）分别为（6.08±0.86）、（7.98±2.59）、（8.31±3.35）h。结论：该UHPLC-MS/MS方法成功地应用于大鼠灌胃白花蛇舌草提取物后的3种二萜类成分药物代谢动力学研究。