目的：建立同时测定人血浆中美罗培南和左氧氟沙星浓度的HPLC-MS/MS方法。方法：以环丙沙星为内标物，血浆用0.1%甲酸甲醇沉淀蛋白。色谱条件：色谱柱为Agilent HC-C₁₈柱（2）（4.6 mm×150 mm，5 μm），以0.1%甲酸甲醇-0.1%甲酸水溶液（50：50）为流动相，流速0.5 mL·min^-1，柱温30℃；质谱条件：电喷雾离子化源，正离子电离模式下多反应离子监测模式（MRM）测定，用于定量分析的离子反应分别为m/z 384.1→m/z 254.0（美罗培南）、m/z 362.0→m/z 318.0（左氧氟沙星）和m/z 3 332.0→288.0（内标，环丙沙星），扫描时间为0.1 s。结果：本试验1个分析样本的分析时间为4 min；美罗培南和左氧氟沙星的血药浓度分别在0.1~100.0和0.01~5.00 μg·mL^-1范围内线性良好，日内精密度分别为1.8%~4.3%和2.1%~6.5%，日间精密度分别为1.3%~4.4%和2.2%~5.5%，准确度分别为98.7%~100.3%和94.8%~100.9%。美罗培南和左氧氟沙星血浆样品经处理后室温放置3 h稳定，-80℃冻融3次稳定。患者血浆样品中美罗培南浓度在0.167 8~47.678 8 μg·mL^-1之间，左氧氟沙星浓度在0.662 0~1.575 0 μg·mL^-1之间。结论：本法前处理简单，分析快速、灵敏、准确，适用于美罗培南和左氧氟沙星的药物浓度监测。