目的：采用背景荧光猝灭-免疫层析法现场快速检测牛奶中林可霉素。方法：采用安装有Simple 1软件系统的背景荧光猝灭免疫分析仪，包括检测卡体系和背景荧光猝灭免疫分析仪，检测卡是其核心部件。基于背景荧光猝灭免疫层析法，建立牛奶中林可霉素的检测方法，制备了可用于快速检测的检测卡，同时进行方法学验证和样品测定。结果：确定检测卡最佳加样量为100 μL，最佳反应时间为10 min；检测卡的灵敏度为0.088 ng·mL^-1，线性范围曲线方程Y=-5.000×10^-6X³+0.000 4X²+0.001 6X+0.489 2，林可霉素在0.0~60 ng·mL^-1之间呈良好的相关性（r=0.992 6）。检测卡批间差RSD均小于2%；长期重复性试验RSD均小于1%。采用本方法实测牛奶样本，与国标方法检测结果比较，t检验结果P>0.05，说明采用背景荧光猝灭-免疫层析法和国标法2种方法比较没有显著性差异。结论：本法研制的检测卡专属性强，灵敏度高，在现场10 min内即可快速定量测定牛奶中林可霉素的含量，可应用于生鲜牛奶的质量控制及现场检测。