目的：建立测定护肝片中柴胡皂苷a、柴胡皂苷b₁、柴胡皂苷b₂、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d的定量分析方法。方法：采用Agilent Eclipse Plus C₁₈（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈（A）-水（B），梯度洗脱（0~40 min，30% A→53% A；40~48 min，53% A→98% A），检测波长210 nm（柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d）、254 nm（柴胡皂苷b₁、b₂），流速1 mL·min^-1，柱温25℃。结果：5个柴胡皂苷分离度良好；柴胡皂苷a、柴胡皂苷b₁、柴胡皂苷b₂、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d进样量分别在0.013 5~0.674、0.015 6~0.781、0.015 2~0.762、0.015 1~0.757和0.013 1~0.653 μg范围内线性关系良好（r≥0.999 5）；稳定性及重复性试验RSD均低于2.0%；平均回收率在99.7%~102.9%，RSD均小于2.0%（n=6）。12个生产厂家50批样品中均未检测到柴胡皂苷a、柴胡皂苷c、柴胡皂苷d，除2个厂家外的其余厂家样品中均检测到柴胡皂苷b₁、柴胡皂苷b₂。结论：所建立的方法简便、快捷、重复性好，可用于护肝片中5个柴胡皂苷的含量测定，为护肝片的全面质量控制提供科学依据。