目的：建立利用仪器分析苯丙哌林未知杂质化学结构的方法，并对2个未知杂质进行结构确证。方法：采用Inertsil ODS-3（4.6 μm，2.1 mm×150 mm）色谱柱，以甲醇-0.01 mol·L^-1醋酸铵缓冲液（取醋酸铵0.77 g，加水800 mL溶解，用冰醋酸调节pH至3.3，用水稀释至1 000 mL）（65∶35）为流动相，流速0.25 mL·min^-1，检测波长270 nm。用HPLC-MS/MS分析2个未知杂质，使用制备液相进行分离纯化，通过核磁共振（¹H-NMR、¹³C-NMR、HMBC、HSQC、DEPT135、H-H COSY）技术，对苯丙哌林及其未知杂质进行结构确证。结果：首次发现并确定苯丙哌林2个未知杂质的结构，分别为1-[2-（2-苯甲酰基苯氧基）-1-甲基乙基]哌啶和1-[2-（2-苄基-6-氯苯氧基）-1-甲基乙基]哌啶。结论：该方法可为苯丙哌林的质量控制提供依据。