目的：建立双波长分子排阻色谱（SEC）测定抗体药物偶联物（ADC）的药物抗体偶联比（DAR）的方法。方法：采用凝胶色谱柱，柱温25℃，以0.1 mol·L^-1磷酸盐-0.1 mol·L^-1氯化钠缓冲液为流动相对100 μg样品进行等度洗脱，流速1.0 mL·min^-1，在248 nm及280 nm双波长下分别对ADC的小分子药物和抗体进行检测；采用紫外分光光度计在248 nm及280 nm处进行吸收度测量。结果：双波长SEC可准确地对ADC的DAR进行测定，测得的DAR为4.17，RSD为0.24%；紫外分光光度（UV）法测得的DAR为3.97，RSD为2.8%。结论：双波长SEC检测可用于ADC样品的DAR测定，同时可对样品的大小异构体进行分析。SEC及UV 2种方法测得的DAR结果相似，都可用于ADC的药物抗体偶联比分析。