生物检定

抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证

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  • 武汉生物制品研究所有限责任公司, 武汉 430207

网络出版日期: 2024-05-31

Establishment and validation of an LC/MS peptide mapping method for the characterization of anti-TNF-α monoclonal antibody

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  • Wuhan Institute of Biological Products Co., Ltd, Wuhan 430207, China

Online published: 2024-05-31

摘要

目的:建立液相色谱-质谱联用肽图分析方法,用于抗人肿瘤坏死因子α(Tumor necrosis factor alpha,TNF-α)单抗的专属性鉴别。方法:TNF-α单抗样品经盐酸胍变性、还原,释放出的游离半胱氨酸残基进行烷化,还原剂中和过量的烷化剂。超滤置换酶切缓冲液后进行胰酶酶切并终止。色谱条件:采用Waters UPLC BEH 300 C18(2.1 mm×150 mm,1.7 μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸乙腈溶液(B)为流动相,梯度洗脱(5~120 min,2% B→45% B),流速为0.2 mL·min-1,检测波长为214 nm;质谱条件:采用电喷雾离子源及正离子模式,数据采集范围m/z为100~1 990。结果:TNF-α单抗重链及轻链的6个互补决定区(CDR)对应肽段由质谱鉴定出,HC CDR2及HC CDR3在色谱峰图中共流出;利妥昔单抗用于评估本方法的专属性,结果显示本方法专属性强,且不受基质的干扰;选定m/z 1 344(M+5)的色谱峰为参考峰,根据CDR的相对保留时间考察该方法的变异程度,5次重复测定CDR相对保留时间的RSD在0.57%~1.19%之间;中间精密度考察测定的相对保留时间的RSD在0.00%~1.08%之间;胰酶酶切比例在20:1~30:1,酶切时间在17~23 h范围内变化时,相对保留时间的均较小,符合方法耐用性的要求;样品消化后在8℃储存24 h以及-20℃储存5 d的稳定性良好。结论:基于CDR相关肽段鉴别的液质联用肽图分析方法可定性鉴定出TNF-α单抗,方法学验证结果显示该方法适用于抗人TNF-α单抗的专属性鉴别,可用于其质量控制及批检验放行。

本文引用格式

桂芳, 杨兰兰, 潘勇兵, 张雅婷, 张银川 . 抗人TNF-α单克隆抗体液质联用肽图分析方法的建立及验证[J]. 药物分析杂志, 2017 , 37(1) : 51 -63 . DOI: 10.16155/j.0254-1793.2017.01.07

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