目的：建立聚山梨酯类化合物的核磁共振和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）定性鉴别方法。方法：核磁共振方法采用5 mm BBO探头的核磁共振仪，在温度25℃下，采集一维氢谱和碳谱。一维氢谱弛豫时间2 s，谱宽δ_H 15，采样点数64 k，扫描次数128次；一维碳谱弛豫时间1 s，谱宽δ_C 236.6，采样点数64 k，扫描次数32 768次。MALDI-TOF-MS方法采用MALDI-TOF-MS质谱仪，采样基质α-氰基-4-羟基肉桂酸（CHCA），采样质量范围m/z 500~4 000。结果：MALDI-TOF-MS质谱图中的特征离子峰可有效定性鉴别聚山梨酯20、40和60。核磁共振¹H谱、¹³C谱中的双键信号峰可有效定性鉴别聚山梨酯80。结论：MALDI-TOF-MS法和核磁共振¹H谱、¹³C谱的结合使用可有效定性鉴别聚山梨酯类化合物。