目的：建立同时测定复方一枝蒿速释微丸中（R，S）-告依春、一枝蒿酮酸、靛玉红3种化学成分含量的高效液相色谱方法。方法：采用Shim-pack ODS色谱柱（250 mm&#215;4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈（A）-0.5%磷酸水溶液（B），梯度洗脱（0~15 min，3% A→10% A；15~20 min，10% A→35% A；20~35 min，35% A），检测波长为245 nm（0~20 min，检测（R，S）-告依春）和289 nm（25~35 min，检测靛玉红和一枝蒿酮酸），流速1.0 mL&#183;min^-1，柱温30℃。结果：（R，S）-告依春、靛玉红、一枝蒿酮酸质量浓度分别在3.904~54.656 μg&#183;mL^-1（r=0.999 5）、3.064~42.896 μg&#183;mL^-1（r=0.999 3）和7.264~101.696 μg&#183;mL^-1（r=0.999 6）范围内呈良好线性关系；复方一枝蒿速释微丸中3种有效成分的平均回收率（n=3）分别为99.27%~100.14%（RSD<1.2%），99.16%~99.72%（rsd<1.4%），99.39%~99.81%（rsd<1.7%）。3批样品中（R，S）-告依春、靛玉红、一枝蒿酮酸3个成分的含量测定结果分别为0.343 5~0.350 1、0.190 7~0.199 9、0.887 2~0.895 6 mg&#183;g^-1。结论：方法学验证结果表明，本法可为复方一枝蒿速释微丸多指标质量评价及控制提供科学依据。