目的：建立一种快速分析发酵虫草菌丝粉中挥发性成分的方法，并用于不同菌种发酵虫草产品的鉴别和特征性成分的寻找。方法：利用顶空固相微萃取结合气相色谱质谱联用（HS-SPME/GC-MS）技术测定发酵虫草菌丝粉的挥发性成分，在优化萃取头、萃取温度、吸附时间、预平衡时间和解吸时间等萃取条件的基础上，建立发酵虫草菌丝粉的HS-SPME/GC-MS测定方法，用峰面积归一化法计算各成分的相对含量，采用主成分分析（PCA）和偏最小二乘判别分析（PLS-DA）2种化学计量学方法对数据进行分析。结果：最佳萃取条件为DVB/CAR-PDMS萃取头、萃取温度90℃、吸附时间80 min、预平衡时间40 min、解析时间2 min。利用建立的HS-SPME/GC-MS方法从金水宝胶囊、百令胶囊、宁心宝胶囊、至灵胶囊和心肝宝胶囊5种发酵虫草制剂中分别鉴定出56、71、72、81和75个化合物，主要包括酯类、醇类、羧酸类、醛类、烃类、酮类、杂环类化合物等。通过化学计量学方法对HS-SPME/GC-MS数据进行处理，实现了不同发酵虫草制剂和伪品的鉴别，并寻找到5种发酵虫草产品中的特征挥发性成分，分别为马索亚内酯、吡嗪酰胺、2-吡咯烷酮、棕榈酸乙酯和棕榈酸。结论：HS-SPME/GC-MS方法可用于发酵虫草产品中挥发性成分的快速分析。结合化学计量学方法对不同发酵虫草制剂进行鉴别和差异性成分寻找，为特征性指标成分的确定提供了一条新思路，为发酵虫草制剂质量标准的制定和提升提供了科学依据。