目的：建立指纹图谱，并采用一测多评法测定正天丸中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、阿魏酸、欧前胡素、异欧前胡素5个化学成分含量。方法：采用高效液相色谱法测定12批正天丸的指纹图谱，建立指纹图谱共有模式。以欧前胡素为内参物，建立升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、阿魏酸和异欧前胡素的相对校正因子，并进行含量计算，实现一测多评；同时采用外标法测定12批正天丸中5种化学成分的含量，比较计算值与实测值的差异，验证一测多评法的准确性。色谱条件：采用Dimonsil C₁₈（2）色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.095%磷酸水溶液（B）为流动相，梯度洗脱（0~5 min，10% A→20% A；5~40 min，20% A→40% A；40~50 min，40% A；50~65 min，40% A→70% A；65~70 min，70% A），流速1.0 mL·min^-1，检测波长310 nm，柱温30℃。结果：12批正天丸指纹图谱标定了共有峰34个，指认了其中5个化学成分。12批样品指纹图谱与对照指纹图谱的相似度均大于0.990。建立的相对校正因子重现性良好，采用校正因子计算的含量值与实测值之间无显著性差异（P>0.05）。结论：所建立的方法可用于正天丸中升麻素苷、5-O-甲基维斯阿米醇苷、阿魏酸、欧前胡素、异欧前胡素5个化学成分的定性定量分析。