目的：建立UPLC-MS/MS法测定猴头菌丝体中18种游离氨基酸的含量。方法：采用Hypersil GOLD C₁₈色谱柱（100 mm×2.1 mm，1.9 μm），以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相，梯度洗脱，流速0.2 mL·min^-1；以电喷雾离子源（ESI）正离子模式将样品离子化，多反应监测（MRM）模式下对18种氨基酸进行测定。结果：18种氨基酸相关系数为0.999 3~1.000；平均回收率（n=6）为98.3%~100.0%，RSD在0.34%~1.5%。9批猴头菌丝体样品中，18种游离氨基酸总量在72.1~97.3 mg·g^-1之间。结论：本法可作为猴头菌丝体中游离氨基酸的含量测定方法。