目的：建立微生物谷氨酰胺转氨酶（microbial transglutaminase，MTGase）残留量检测的酶联免疫吸附法（ELISA法），并进行方法学验证，用于MTGase催化偶联的生物制品的质量控制。方法：利用MTGase单抗和MTGase兔多抗，建立了MTGase的双抗体夹心ELISA方法，并验证了该方法的定量限、精密度和准确度、稀释可靠性、稳定性和专属性等，对3批PEG-IFNα2a原液进行重复测定。结果：该方法的定量限为0.165~10 ng·mL^-1，在0.05~40 ng·mL^-1范围内拟合度高，R²>0.99，板内和板间精密度和准确度均在（±）15%以内；样品经不同倍数稀释后，回归计算样品的准确度在±15%以内，精密度小于15%；样品室温放置2 h或冻融1次和3次，结果显示质控样品采用该方法检测的精密度均小于15%，回收率为80%~120%；应用该方法在不同稀释倍数的PEG-IFNα2a原液中等量添加5 ng·mL^-1质控样品，结果显示加标样品回收率为97.7%~101.1%。3批PEG-IFNα2a原液MTGase残留量重复测定的板内和板间精密度均在15%以内，MTGase的残留量均低于总蛋白含量的0.01%。结论：ELISA法可用于生物制品中MTGase残留量的检定。