目的：建立芫花和黄芫花的特征图谱，并对芫花和黄芫花中主要化学成分进行定量研究。方法：采用HPLC-UV法建立芫花和黄芫花的特征图谱，采用Diamonsil C₁₈色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），以乙腈（A）-0.1%甲酸水（B）为流动相，梯度洗脱，流速0.7 mL·min^-1，检测波长350 nm，进样量20 μL。采用LC-MS/MS法同时测定不同产地芫花和黄芫花中的主要化学成分含量，使用Agilent Zorbax SB C₁₈柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇（A）-0.1%甲酸水（B），梯度洗脱，流速0.8 mL·min^-1，进样量10 μL，以电喷雾离子源进行负离子模式扫描，多反应离子监测（MRM）进行定量分析。结果：采用HPLC-UV法分别建立了不同产地芫花和黄芫花药材的特征图谱，其中标定了6个共有峰作为芫花药材的特征峰，4个共有峰作为黄芫花药材的特征峰。采用HPLC-MS法同时测定了不同产地的11批芫花与16批黄芫花中的13种黄酮和3种酚酸类成分的含量，含量分析和聚类分析结果都表明芫花和黄芫花2种药材中主要成分存在显著性差异。结论：该法为芫花和黄芫花的鉴别和质量控制提供了科学依据，为临床用药的安全性提供了保障。