治疗性寡核苷酸(oligonucleotides,OGNs)药物是人工化学合成的短单链或双链核酸,长度通常为15~30个碱基对。OGNs作为一种新的治疗药物正在迅速发展,并在各种疾病领域的药物发现和开发中受到越来越多的关注。与欧美相比,除Spinraza (nusinersen)作为孤儿药在中国获批上市外,暂无其他OGNs药物在国内上市。国内OGNs药物开发起步较晚,仍然处于发展初期,但由于国内患者群体基数较大,需求较多,未来伴随OGNs药物开发的持续推进,以及国内企业相应技术的逐步成熟,我国OGNs药物市场有望迎来快速发展。OGNs药物由于其独特的理化性质,生物分析方法开发难度大,目前,国内关于OGNs药物定量分析方法的报道还很少。开发一种灵敏可靠的方法来表征生物样品中的OGNs是研究其药代动力学和药效学性质的关键。相对于传统的ELISA法,LC-MS法可以同时定量完整OGNs及其代谢物,特别是高分辨质谱的广泛应用不仅可以提供目标OGNs的定量信息,还可以对代谢物进行鉴定,提供碱基组成、序列结构等信息,目前已成为OGNs定量分析的首选方法。本文主要描述了LC-MS在治疗性OGNs药物检测中的应用,并阐述了其优点和局限性,最后探讨了LC-MS用于检测OGNs的发展趋势,即更低的检测水平和潜在的通用方法。

目的:对新疆紫草野生品与栽培品的质量进行比较研究,包括性状对比和结合化学计量学分析新疆紫草野生品与3个不同地区栽培品的差异性成分。方法:分别采集新疆紫草野生品与栽培品,对其性状进行对比;采用Waters ACQUITY UPLC BEH C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,以乙腈-0.05%甲酸水为流动相,检测波长275 nm,流速0.2 mL·min^-1,对48批野生品和栽培品中的右旋紫草素、乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁和异戊酰紫草素6个成分进行含量测定,并结合主成分分析(PCA)和正交偏最小二乘-判别分析(OPLS-DA)分析野生品和栽培品中的差异性成分。结果:新疆紫草野生品与栽培品在性状上存在较大差异,建立的含量测定方法线性关系良好,r>0.999,平均加样回收率93.4%~102.9%,RSD<3.0%,不同批次新疆紫草中6个成分含量差异较大,其中野生品中右旋紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁含量均明显高于栽培品,说明野生品与栽培品还存在一定的差异;建立的PCA模型可区分野生品和栽培品,且通过OPLS-DA确定了异丁酰紫草素和β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁是野生品和栽培品中的2个差异性成分。结论:通过对比野生品和栽培品的木心大小、栓皮卷曲程度以及特异性气味,可对二者进行初步鉴别;建立的含量测定方法重复性好,专属性强,稳定可行;确定了新疆紫草野生品与3个不同地区栽培品的差异性成分,为新疆紫草的质量控制提供依据,为扩大紫草药源提供了思路。

促甲状腺激素(thyroid-stimulating hormone,TSH)是由垂体前叶产生的糖蛋白激素。可调节甲状腺滤泡细胞中甲状腺激素的合成和分泌,具有重要生理学意义,作为药物具有重要应用价值,生物学活性检测是评价其质量的有效和必要手段,本文就促甲状腺激素的信号转导作用机理、促甲状腺激素的临床诊断与治疗、生物学活性测定方法进行论述。

分析方法性能持续确认是确保方法在完成验证后持续满足其预期用途的过程。本文在前期研究的基础上,进一步探讨方法性能持续确认的指标(包括系统适用性指标和报告值等)和实施分析工具(控制图),并以示例演示方法性能持续确认的具体操作步骤。希望本文可以为药品领域,特别是企业和监管部门在方法确认的科学化、规范化方面提供新的思路。

目的:建立复方氨基酸注射液(3AA)的主成分和有关物质测定的高效液相色谱方法。方法:采用反相高效液相色谱法并结合二维柱切换LC/MSⁿ法对制剂中主要杂质进行分离和结构鉴定,建立复方氨基酸注射液(3AA)中缬氨酸、异亮氨酸和亮氨酸及其有关物质含量检测方法。采用Capcell PAK AQ C₁₈(250 mm×4.6 mm,3 μm)色谱柱,以0.2 mol·L^-1磷酸二氢钠溶液(用磷酸调pH至2.8)-乙腈(98∶2)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,柱温40 ℃,检测波长210 nm,进样量20 μL。采用Thermo Accucore AQ C₁₈(100 mm×4.6 mm,2.6 μm)色谱柱,以0.1%甲酸溶液为流动相A,以0.1%甲酸溶液-乙腈为流动相B,流速0.4 mL·min^-1,柱温40 ℃;质谱条件采用ESI电离源,正离子扫描模式,扫描范围为m/z 100~1 000,二级质谱采用数据依赖型扫描开展。结果:主峰和相邻杂质峰分离度良好,缬氨酸的线性范围为1.263~5.050 mg·mL^-1,平均回收率(n=9)为99.0%;异亮氨酸的线性范围为1.350~5.402 mg·mL^-1,平均回收率(n=9)为99.4%;亮氨酸的线性范围为1.647~6.588 mg·mL^-1,平均回收率(n=9)为99.5%。3批样品中主要杂质均为原料引入的工艺杂质,其中甲硫氨酸含量分别为4.344、3.751、4.503 μg·mL^-1,苯丙氨酸含量分别为4.636、4.889、4.753 μg·mL^-1。其他单个未知杂质分别为0.01%、0.02%、0.01%。结论:经方法学验证,本方法可用于复方氨基酸注射液(3AA)的质量控制。

目的:建立超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-MS/MS)法同时测定小槐花中9个成分(烟酸、山柰酚、当药黄素、槲皮素、木犀草素、芦丁、牡荆素、斯皮诺素、水杨酸)的含量并构建BP(back propagation)神经网络模型对不同产地的小槐花进行产地预测。方法:采用安捷伦ZORBAX SB-C₁₈(50 mm×3.0 mm,1.8 μm)色谱柱,以0.1%乙酸(含0.02 mol·L^-1乙酸铵)水溶液(A)-甲醇(B)为流动相,梯度洗脱,体积流量0.3 mL·min^-1。质谱采用ESI正负离子检测模式,多反应监测模式(MRM)的扫描模式。测得各成分含量进行相关性分析,并构建BP神经网络模型用于进行不同产地的小槐花药材的溯源。结果:小槐花中烟酸、山柰酚、当药黄素、槲皮素、木犀草素、芦丁、牡荆素、斯皮诺素、水杨酸9个成分质量浓度分别在0.388 8~38.88、10.07~1 006.6、34.22~34 221.6、3.944~394.4、2.124~212.4、4.344~434.4、46.50~4 650.1、1.649~164.9、4.880~488.0 ng·mL^-1范围内线性关系良好(r＞0.995 1),平均加样回收率96.9%~103.9%,RSD均＜1.9%。40批小槐花中烟酸、山柰酚、当药黄素、槲皮素、木犀草素、芦丁、牡荆素、斯皮诺素、水杨酸9个成分的含量分别为1.657~7.407、15.801~64.488、1 068.348~4 270.780、10.608~123.228、3.897~16.802、1.269~97.834、405.285~1 955.796、13.614~36.124、4.417~87.509 μg·g^-1。通过相关性分析可知,当药黄素、芦丁、斯皮诺素、木犀草素4个成分相互呈高度线性正相关,表明小槐花中这4个成分具有一定互相协同的作用。构建BP神经网络模型用于预测不同产地的小槐花样品,检验集的正确率达到92.3%。结论:试验建立的方法简便、灵敏、高效,可用于小槐花成分的快速测定,结合BP神经网络模型对产地进行预测在小槐花产地的溯源中有一定作用。

目的:建立高分辨采样二维液相色谱法(HiRes 2D-LC)对维生素D滴剂中维生素D₃进行准确定量分析。方法:第一维液相色谱采用Thermo HYPERSIL Gold Silica(100 mm×2.1 mm,1.9 μm)色谱柱,以正己烷-正戊醇(996∶4)为流动相,流速0.2 mL·min^-1,检测波长265 nm,柱温40 ℃;第二维液相色谱采用ShimPack Velox Hilic(50 mm×2.1 mm,2.7 μm)色谱柱,以正己烷-正戊醇-异丙醇(98∶1∶1)为流动相,流速0.5 mL·min^-1,检测波长265 nm,柱温40 ℃。二维接口采用六位十四通阀,并配置2个多中心切割阀,对前维生素D₃峰和维生素D₃峰进行多次连续切割。结果:维生素D₃质量浓度在1.018 4~5.092 mg·mL^-1范围内线性关系良好(r≥0.999 8),前维生素D₃和维生素D₃精密度试验RSD分别为0.95%和0.40%,重复性试验RSD为0.41%,平均加标回收率为101.4%。供试品溶液在4 ℃和10 ℃放置12 h稳定,RSD分别为0.58%、0.66%。采用本法测得6批维生素D滴剂样品中维生素D₃的含量分别为100.4%、101.6%、100.9%、101.6%、102.7%、101.6%,与采用2020年版《中华人民共和国药典》四部通则0722第四法所测结果基本一致。结论:本方法具有优异的灵敏度、重复性和定量准确性,且省去烦琐的样品前处理步骤,缩短分析时间,改善长样品环带来的峰展宽等问题,显著提高了维生素D₃的含量测定效率,降低分析成本,为维生素D滴剂等主成分与辅料难分离制剂的准确定量提供新方法。

目的:基于宏基因组测序的方法比较紫草市场药材正伪品对小鼠肠道菌群调节作用的异同。方法:首先将24只清洁级雌性BLAB/C小鼠随机分为3组,分别为空白对照组、A1(新疆紫草)组、A2(紫草非药典品)组,灌胃到达指定时间后,提取结肠内容物(粪便)、回肠内容物(粪便)、小肠内容物(粪便,除去回肠部位)用于肠道菌群分析;对提取的小鼠肠道内容物进行基因组DNA提取和PCR扩增,对PCR产物进行混样和纯化,构建文库并上机测序;对测序数据进行质控,并去除其中的嵌合体序列后,得到最终的有效数据;对获得的有效数据进行分类操作单元(operational taxonomic unit,OTU)聚类和物种注释,并进行样本多样性分析。结果:本研究中A1、A2组均降低了小鼠结肠菌群多样性;在门水平上,A1组显著提高了小鼠小肠和回肠中Firmicutes的丰度,A1、A2组显著提高了小鼠结肠中Bacteroidetes的相对丰度;在属水平上,A1组显著提高了小鼠小肠中Lactobacillus的相对丰度,A2组显著提高了小鼠回肠中Lactobacillus的相对丰度;A1组提高了小鼠结肠中优势菌之一Lactobacillus的相对丰度,A2组提高了结肠中Bacteroides的相对丰度;病原菌Alistipes主要存在于结肠中,A2实验组显著降低了小鼠结肠中Alistipes的相对丰度,而A1实验组则扶植了小鼠结肠中的Alistipes。结论:根据肠道菌群调节作用的结果,紫草药材中药典收载品和市场混淆品2个实验组的肠道菌群调节作用不一致,本研究结果可为深入探索其作用机制提供理论基础。

目的:建立栝楼桂枝汤(Gualou Guizhi decoction)物质基准指纹图谱和多成分含量测定方法,探究饮片-物质基准关键质量属性的量值传递规律。方法:制备15批栝楼桂枝汤物质基准,采用ChromCore 120 C₁₈ (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,进行梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1,柱温30 ℃,检测波长254 nm,采用中药色谱指纹图谱相似度评价软件(2012年版)建立指纹图谱,结合层次聚类分析(hierarchical cluster analysis, HCA)、主成分分析(principal component an alysis, PCA)与正交偏最小二乘法-判别分析(orthogonal partial least squares-discriminant analysis, OPLS-DA),筛选不同批次栝楼桂枝汤物质基准质量差异的主要化学成分。建立HPLC法测定主要差异性成分含量,以含量、出膏率和转移率分析栝楼桂枝汤的量值传递规律。结果:建立了栝楼桂枝汤物质基准HPLC指纹图谱,确定30个共有峰,与对照品比对共指认出其中9个成分,分别为没食子酸、芍药内酯苷、芍药苷、甘草苷、芒柄花苷、甘草素、肉桂酸、异甘草素、甘草酸。15批栝楼桂枝汤物质基准指纹图谱相似度均>0.920。3种化学识别模式均将样品分为2类,造成主要差异化学成分共5个,分别为甘草酸、甘草素、芍药苷、甘草苷、芒柄花苷。建立了多成分HPLC含量测定方法,符合方法学要求。饮片-物质基准之间5个差异成分的平均转移率分别为51.65%、40.46%、74.74%、60.06%、34.54%,平均出膏率为14.20%。结论:栝楼桂枝汤物质基准的关键质量属性在饮片-物质基准间稳定传递。建立的栝楼桂枝汤指纹图谱和含量测定方法准确、可靠,可为栝楼桂枝制剂的质量控制提供技术参考。

目的:基于正交试验设计的多指标加权评分法分析研究并优化醋芫花饮片的炮制工艺,为规范芫花饮片的醋制炮制工艺提供技术支持。方法:采用正交试验设计,以醋制品中绿原酸、银椴苷、木犀草素、芹菜素、羟基芫花素、芫花素6个成分的总含量,醇溶性浸出物的量及外观性状为评价指标,分析辅料醋用量、闷润时间、炮制温度及炮制时间4个因素对炮制工艺的影响,并优选芫花饮片的醋制工艺。结果:辅料醋用量及炮制温度对试验结果有显著影响,而闷润时间及炮制时间对试验结果无显著影响,综合考察各因素对工艺的影响,优化后的醋炙芫花炮制工艺为每1 kg芫花饮片加醋0.3 kg,闷润15 min后160 ℃炒制10 min。结论:本研究对规范芫花的醋制炮制工艺具有一定的指导和参考意义。

目的: 采用超高效液相色谱-四极杆／静电场轨道阱质谱(UPLC-Q/Orbitrap HRMS)鉴定马来酸噻吗洛尔中的有关物质。方法: 采用ACE Excel3 C₁₈-AR(150 mm×4.6 mm,3 μm)色谱柱,以含0.01 mol·L^-1乙酸铵的0.2%甲酸水-甲醇为流动相梯度洗脱,流速0.6 mL·min^-1,紫外检测器检测波长295 nm,质谱检测器采用HESI离子源,正负离子检测模式,碎片和裂解分析借助Mass Frontier 8.0和Compound Discover 3.3软件,通过对主成分进行破坏可以获得系统适用性溶液对样品中的杂质采用UPLC-Q/Orbitrap进行鉴定和分析。结果: 主成分在特定条件下可产生出噻吗洛尔杂质B{(±)-1-(叔丁氨基)-2-[(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑-3-基)氧]-1-丙醇}、噻吗洛尔杂质D(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑)、噻吗洛尔杂质E((S,Z)-4{(-)-1-(叔丁氨基)-2[(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑-3-基)氧]-4-氧代丁烯二酸})和噻吗洛尔杂质C{(±)-N-(叔丁氨基)-2,3-二[(4-吗啉基-1,2,5-噻二唑-3-基)氧]-2-丙烷胺},噻吗洛尔峰和各杂质峰分离良好,采用紫外检测器测定,定量限为0.05 μg·mL^-1,检测限为0.015 μg·mL^-1。结合UPLC-Q/Orbitrap HRMS结果和文献报道,推测了另外6个主要杂质的结构。4家企业生产的8批样品测定结果单个杂质含量在0.000 4%~0.09%,总杂质含量在0.02%~0.12%。结论: 通过主成分破坏可获得系统适用性溶液,并用于马来酸噻吗洛尔中杂质的检测与鉴定,结果可为马来酸噻吗洛尔的质量控制提供参考依据。

目的:建立同时测定雷公藤饮片中雷公藤甲素、雷公藤内酯酮、雷酚内酯、雷公藤次碱、雷公藤内酯甲、雷公藤红素6个活性成分RP-UPLC-PDA分析方法。方法:雷公藤饮片采用乙酸乙酯超声提取,甲醇溶解分离,利用RP-UPLC-PDA法对其6个成分进行定量分析,采用Acquity^TM UPLC BEH C₁₈ (100 mm×2.1 mm, 1.7 μm)色谱柱,柱温30 ℃,以乙腈(A)-0.1%甲酸水(B)为流动相,进行梯度洗脱,流速0.4 mL·min^-1,进样量2 μL。结果:6个活性成分在测定浓度范围内线性关系良好(0.999 2≤r≤0.999 7);加样回收试验中平均回收率为99.2%~103.1%,RSD为1.2%~2.9%。对10批不同产地雷公藤饮片进行含量测定,结果显示不同产地饮片中成分含量具有差异性,雷公藤甲素含量最高为140.2 μg·g^-1,最低为103.2 μg·g^-1;雷公藤内酯酮含量最高为224.7 μg·g^-1,最低为112.2 μg·g^-1;雷酚内酯含量最高为306.7 μg·g^-1,最低为189.6 μg·g^-1;雷公藤次碱含量最高为283.2 μg·g^-1,最低为211.2 μg·g^-1;雷公藤内酯甲含量最高为31.2 μg·g^-1,最低为16.8 μg·g^-1;雷公藤红素含量最高为87.6 μg·g^-1,最低为52.1 μg·g^-1。结论:建立RP-UPLC-PDA法能够同时测定雷公藤饮片中6个成分,方法稳定,结果可靠,适用于雷公藤饮片定量分析测定。

目的:建立以环糊精为流动相添加剂的高效液相色谱法测定山茱萸中熊果酸和齐墩果酸,为山茱萸的质量控制提供依据。方法:运用分子设计和效应面法优化山茱萸中熊果酸和齐墩果酸含量测定的方法,采用安捷伦Eclipse XDB C₁₈(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-3 mmol·L^-1 γ-环糊精溶液(含0.05%磷酸)(60∶40)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,柱温25 ℃,检测波长210 nm。结果:熊果酸和齐墩果酸的分离度为3.81,熊果酸进样量在400~4 000 ng,齐墩果酸进样量在200~2 000 ng范围内线性关系良好(r=0.999 7和0.999 9),精密度RSD≤1.4%,重现性RSD≤1.8%,稳定性RSD≤1.7%,回收率分别为98.5%(RSD=1.7%)和99.1%(RSD=2.0%),3批山茱萸药材中熊果酸含量分别为2.66、2.35和2.91 mg·g^-1,齐墩果酸含量分别为0.83、0.78和1.12 mg·g^-1。结论:该方法简便,准确可靠,且经济环保,可作为山茱萸的质量控制方法。

方法变更作为方法全生命周期中的一环,随着新技术的不断涌现,对产品质量需求的不断提高,3R和环境保护以及降低成本等要求的不断增加,越来越受到重视。本文参考国内外对方法学研究的最新进展,从方法学角度对方法变更进行系统的类别划分,并对不同方法变更类型间的差异和对变更后方法的评价标准和实施方式进行探讨。

生物活性检测方法在生物制品研发和质量控制中发挥着关键作用,近年来对该类方法的方法学研究也取得了长足进展。本文首先回顾生物活性检测方法研究的历史进程;其次,对国内外的药典、法规及技术指南中的生物活性检测方法内容进行梳理;最后,对生物活性检测方法学相关的最新进展进行概述和分析,包括分析方法生命周期、分析目标概要等新概念的介绍。希望本文能为药品行业相关人员全面了解国内外药品生物活性检测方法及其相关指导原则提供参考。同时,也希望为药品研发人员建立科学、可靠的生物活性检测方法提供理论支持。

目的: 构建人脐静脉细胞膜色谱(HUVEC/CMC)模型,并将其应用于莱菔子中抗血管性疾病活性成分的快速筛选。方法: 采用HUVEC/CMC模型二维在线联用HPLC-ESI IT TOF MS系统对莱菔子活性成分进行分离、筛选和鉴定,并将筛选的活性成分进一步作用于氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的HUVEC,验证其保护作用。结果: 利用所建立的方法从莱菔子中共筛选出2个保留组分,通过与对照品比对,鉴定出1个成分为芥子酸。与模型组比较,芥子酸低、中、高预处理组细胞存活率显著增加,细胞中ICAM-1和VCAM-1的含量下降,并呈剂量依赖性;Bcl-2蛋白表达水平下降、Bax蛋白表达升高,具有统计学意义(P<0.05)。结论: 构建的HUVEC/CMC在线联用HPLC-ESI IT TOF MS系统可用于快速筛选复杂中药体系中活性成分,为细胞膜色谱的应用和莱菔子的开发提供了参考。

目的:建立同时测定艾叶中7个黄酮类成分(5-羟基-6,7,3’,4’-四甲氧基黄酮、芹菜素、高车前素、山柰酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素、蔓荆子黄素)的一测多评含量测定方法(QAMS法)。方法:采用高效液相色谱法,Agilent ZORBAX SB-C₁₈色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以乙腈-0.2%磷酸水溶液为洗脱流动相,进行梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长350 nm,柱温30 ℃。以异泽兰黄素为内参物,建立与其他6个黄酮类成分的相对校正因子,并计算7个待测成分的含量,实现一测多评。同时与外标法进行比较,以验证QAMS法的准确性和可行性。结果:在一定的线性范围内,异泽兰黄素与5-羟基-6,7,3’,4’-四甲氧基黄酮、芹菜素、高车前素、山柰酚、棕矢车菊素、蔓荆子黄素的相对校正因子值分别为0.958、1.387、1.000、0.950、0.957、1.297(相对校正因子的RSD<2.0%),并与常规外标一点法比较,20批艾叶中5-羟基-6,7,3’,4’-四甲氧基黄酮、芹菜素、高车前素、山柰酚、棕矢车菊素、异泽兰黄素、蔓荆子黄素的含量测定结果分别为0.031 4~0.623 5、0.000 9~0.092 6、0.020 6~0.170 7、0.011 0~0.184 7、0.011 7~0.864 0、0.253 2~2.555 0、0.015 6~0.250 7 mg·g^-1。结论:以异泽兰黄素为内参物,建立艾叶中7个黄酮类成分的QAMS法准确、可行,可用于艾叶的定量分析及质量控制。

近些年,国内基因治疗行业迅速发展,创新制品不断涌现,如何对该类制品进行有效的质量控制成为业界十分关心的问题。本文借鉴基因治疗制品质量控制领域中相对成熟的、有效的、实用性被证明的方法,以重组腺相关病毒基因治疗制品为例,从检测项目与检测方法的选择、注意事项、质量标准的拟定等方面出发,阐述了其质量控制检验项目及相关技术要求。希望本文能为从业者开展该类制品的质量控制研究提供参考,并通过后续的交流讨论可达成一定共识,进而加速推动我国基因治疗行业的发展。

科学的实验设计是保证检测方法的结果准确性和结论可靠性的主要工具。本文对影响因素多且变异大的生物活性检测方法验证所需的实验设计进行了探讨,并详细阐述了在方法验证设计中样本量的计算方法。希望今后能为生物活性检测方法验证人员准确理解方法验证实验设计提供理论参考。

目的:建立高效液相色谱-串联质谱法(HPLC-MS/MS法)同时检测大鼠血浆中6个黄芩特征成分(黄芩素、黄芩苷、汉黄芩素、汉黄芩苷、白杨素及千层纸素A)的含量,比较大鼠牛黄解毒片及黄芩给药后黄芩特征成分在大鼠体内药代动力学行为的差异。方法:2组大鼠分别灌胃给予牛黄解毒片混悬液250 mg·kg^-1或处方等量的黄芩饮片提取液,收集不同时间点血浆样本,以柚皮素为内标,经甲醇沉淀蛋白后,采用Inertsil C₈-3(150 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液(A)-0.1%甲酸甲醇溶液(B)为流动相,线性梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,柱温35 ℃,采用电喷雾离子源(ESI),正离子扫描,多反应监测模式(MRM)检测黄芩特征成分,并计算药代动力学参数。结果:黄芩素、黄芩苷、汉黄芩素、汉黄芩苷、白杨素及千层纸素A 6个黄芩特征成分均在5~500 ng·mL^-1范围内线性关系良好,准确度为88.43%~108.6%,批间精密度及批内精密度均＜15%,基质效应和血浆样品稳定性均可满足生物样品分析要求。大鼠灌胃黄芩饮片提取液及牛黄解毒片混悬液后,血浆中检测出黄芩苷及汉黄芩苷2个主要成分;与单味黄芩组比较,牛黄解毒片组给药后大鼠血浆中汉黄芩苷的AUC_0-t、黄芩苷与汉黄芩苷的C_max均显著增加,T_max显著缩短。结论:建立的方法能同时测定黄芩6个特征成分,且专属性强,灵敏度高,适用于大鼠血浆药代动力学研究。牛黄解毒片复方配伍增强了黄芩的特征成分在大鼠体内的吸收利用,改变了黄芩特征成分的药代动力学行为。

目的: 采用细胞因子微球检测技术测定异种脱细胞真皮基质口腔修复膜免疫评价中细胞因子的含量。方法: 将异种脱细胞真皮基质口腔修复膜为试验样品, 按照高、中、低剂量组植入至Balb/C 小鼠皮下28 d。28 d 后用细胞因子微球检测技术测定IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、γ 干扰素（IFN-γ）、β 干扰素（IFN-β）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）, 将试验组与对照组的数据进行统计学分析。结果: 阳性对照组中IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-17A、TNF-α、IFN-γ、MCP-1、GM-CSF 含量显著性高于假手术组（P<0. 01）, 而IL-10、IL-23、IFN-β 含量未见明显差异;被测样品植入试验组中, 除MCP-1 和TNF-α 高剂量组显著性高于假手术组（分别为P<0. 01 和P<0. 05）, 其他组的IL-1α、IL-1β、IL-6、IL-10、IL-17A、IL-23、TNF-α、IFN-γ、IFN-β、MCP-1、GM-CSF 含量没有明显变化（P>0. 05）。结论: 采用细胞因子微球检测技术测定细胞因子水平, 异种脱细胞真皮基质口腔修复膜对机体细胞因子无明显影响。

目的:基于DNA条形码和PCR-RFLP技术研究进口紫草ITS2序列的特征,为市场紫草药材和饮片的质量控制与真伪鉴别提供参考依据。方法:选用ITS2区域作为对进口紫草和紫草对照药材进行比较、鉴定的DNA条形码序列,并基于DNA条形码和PCR-RFLP技术比较不同来源进口紫草的ITS2序列与紫草对照药材的异同。结果:39份进口紫草样品经限制性内切酶AluI酶切后,其产物的琼脂糖凝胶电泳检测结果显示,仅DH3在500 bp左右有条带,而在100~300 bp无条带,其余样品均在100~300 bp有2条或3条明显条带;进口紫草样品与紫草对照药材的ITS2序列进行比对,其中样品DH3与紫草对照药材的碱基差异最多,有15个碱基差异,样品F2与紫草对照药材的ITS2序列一致,其他进口紫草样品与紫草对照药材的碱基差异为1~9个碱基;从聚类结果中可以看出进口紫草样品DH3与其他进口紫草样品和紫草对照药材均明显区分,独自为一枝,而与紫草对照药材共同聚为一枝且支持率≥50%的样品共有14个。结论:选用ITS2区域,基于DNA条形码和PCR-RFLP技术,比较了进口紫草与紫草对照药材ITS2序列的异同,为紫草药材及饮片的有效鉴定提供参考依据,为紫草药材的市场监管提供有力保障。

脂质体是成功转化为临床应用的药物递送系统。在过去的几十年里,脂质体作为载药系统在治疗领域中开展了广泛和深入的研究,国内外已有多种脂质体药物的上市产品,但目前针对其系统的质量检测与评价的方法报道较少。本文结合国内外文献资料及相关技术指导原则,对脂质体药物的制备工艺及系统的质量评价方法等进行综述,为脂质体给药技术的开发和评价提供参考。

目的:采用超高效液相色谱法同时测定炎可宁片中黄柏碱、黄连碱、黄芩苷、巴马汀、小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚13个成分含量。方法:采用Agilent Eclipse Plus-C₁₈(100 mm×2.1 mm,1.8 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,流速0.3 mL·min^-1,测定波长210、254 nm,柱温40 ℃。结果:盐酸黄柏碱、盐酸黄连碱、黄芩苷、盐酸巴马汀、盐酸小檗碱、汉黄芩苷、黄芩素、芦荟大黄素、大黄酸、汉黄芩素、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚的的线性范围分别为0.97~48.63、0.95~47.52、0.86~43.15、0.86~43.19、0.89~44.37、1.00~49.84、1.02~51.01、0.97~48.31、0.99~49.50、1.04~51.80、1.00~50.04、1.00~49.80、1.01~50.64 μg·mL^-1;平均回收率(n=6)分别为95.2%、96.7%、98.3%、94.1%、95.9%、97.6%、99.2%、96.6%、95.5%、97.2%、97.0%、97.8%、98.7%,RSD均<2.0%。3批样品中上述13个成分的含量分别为1.367~1.488(以盐酸黄柏碱计)、0.378~0.412(以盐酸黄连碱计)、4.611~5.505、0.324~0.407(以盐酸巴马汀计)、3.665~3.878(以盐酸小檗碱计)、1.107~1.682、0.392~0.941、0.076~0.105、0.097~0.116、1.059~1.213、0.149~0.167、0.213~0.239、0.047~0.059 mg·g^-1。结论:该方法准确,分析效率高,重复性好,适用于炎可宁片的质量控制。

目的: 针对硫酸吗啡栓含量测定方法中萃取溶剂毒性较高以及色谱条件专属性、通用性欠佳的问题进行优化。方法: 供试品溶液制备方法的优化是采用冰浴冷冻法和正庚烷萃取法制备供试品溶液,并与美国药典方法(三氯甲烷萃取)制备的供试品溶液进行含量测定结果的比较。含量测定色谱条件的优化是在综合比较美国药典、英国药典以及YBH标准的基础上,最终采用Symmetry C₁₈色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以含0.202%庚烷磺酸钠的0.01 mol·L^-1磷酸二氢钾溶液(含0.1%三乙胺,用磷酸调节pH至2.5)-甲醇(70∶30)为流动相,流速为1.0 mL·min^-1,柱温为30 ℃,检测波长为284 nm,进样体积为20 μL。结果: 采用冰浴冷冻法测得的含量偏低,而正庚烷萃取与三氯甲烷萃取的含量测定结果基本一致,说明可采用正庚烷替代卤代烷烃作为萃取溶剂。采用新建色谱方法,硫酸吗啡的线性范围为2.12~105.94 μg·mL^-1(r=0.999 9),定量限为10.60 ng;系统精密度、重复性、中间精密度、稳定性的RSD均小于2%;平均回收率为98.6%~99.6%,RSD为0.21%~0.66%;供试品溶液经强制降解后主峰与各降解杂质均能够实现良好的分离,专属性良好;通过改变流速、柱温、pH、流动相比例以及色谱柱品牌,均能够实现主峰与各杂质峰的良好分离,耐用性良好。结论: 本研究优化了硫酸吗啡栓的含量测定方法,供试品溶液的制备采用正庚烷代替了高毒性的卤代烷烃,同时改善了色谱条件,提高了方法的环保性、专属性和适用性,可用于硫酸吗啡栓含量的测定。

目的: 采用CFSE法与CCK-8法评价同种异体骨对人外周血淋巴细胞的活性与增殖效应。方法: 通过人新鲜外周血淋巴细胞与供试品(脱钙骨基质与冻干型组织工程骨)浸提液共培养后,采用CCK-8法检测淋巴细胞的活性水平。通过CFSE标记的人新鲜外周血淋巴细胞与供试品浸提液共培养后,采用流式细胞术检测淋巴细胞增殖能力。结果: CCK-8法试验结果表明,脱钙骨基质组的吸光度值与培养液对照组相比无显著性差异,而冻干型组织工程骨组的吸光度值与培养液对照组相比显著增高(P<0.05),表明冻干型组织工程骨提高了淋巴细胞的活性。CFSE法试验结果表明,与培养液对照组相比,冻干型组织工程骨组的淋巴细胞增殖相关指标(Dil、PF、EI、RI)以及淋巴细胞亚群增殖指标Dil均无显著性差异(P>0.05),表明冻干型组织工程骨未对人外周血淋巴细胞的增殖产生显著性影响。结论: 与培养液对照组相比,冻干型组织工程骨提高了人外周血淋巴细胞的活性,但是未对人外周血淋巴细胞的增殖产生显著影响。CCK-8法主要反映的是细胞活性,而CFSE法可以更客观地反映细胞有无增殖。

目的:测量紫草的色泽,测定紫草中6个主要紫色素类成分(乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰紫草素)的含量,研究新疆紫草色泽与6个主要紫色素成分含量的相关性。方法:采用分光测色仪测定样品粉末的L、a、b值用于表征紫草的色泽。国际照明委员会(CIE)制定了Lab颜色模型,是人类视觉的数字化描述,L值越大表示亮度越大,a值增大表示偏红减小表示偏绿,b值增大表示偏黄减小表示偏蓝;采用高效液相色谱法(HPLC)测定紫色素类成分的含量,使用SPSS软件计算L、a、b值与6个主要紫色素含量的相关程度。结果:135批样品乙酰紫草素的含量为0.01%~3.39%,β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁含量为0.00%~1.95%,去氧紫草素含量为0.00%~0.23%,异丁酰紫草素含量为0.01%~1.13%,异戊酰紫草素含量为0.02%~2.88%,β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁含量为0.01%~2.17%。紫草药材的L(黑_白)色度值与乙酰紫草素、β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁和异丁酰紫草素3个成分的含量呈显著负相关关系,斯皮尔曼相关系数在-0.138和-0.222之间;a(绿_红)色度值与β-乙酰氧基异戊酰阿卡宁、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰阿卡宁的含量均呈现显著的正相关,斯皮尔曼相关系数在0.176和0.355之间;b(蓝-黄)色度值与乙酰紫草素、去氧紫草素、异丁酰紫草素、β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁、异戊酰阿卡宁均呈现显著的相关性,其中,与β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁呈正相关,系数为0.290,与其余4个成分呈负相关,系数在-0.325和-0.633之间。结论:建议紫草(新疆紫草)的含量测定项修订为β,β’-二甲基丙烯酰阿卡宁不得少于0.30%并且异丁酰紫草素不得少于0.29%。

目的:通过测定左氧氟沙星的溶解性和体外渗透性,对比仿制与参比制剂的处方差异,考察差异性辅料对原料渗透行为的影响,并预测2种制剂的生物等效性,旨在探究基于平行人工膜渗透试验(PAMPA)的体外渗透性数据申请生物等效性豁免的可行性。方法:采用高效液相色谱法测定原料在pH 1.0~pH 6.8的溶解性;采用μFlux^TM系统,在供体室中分别精密加入pH 5.0的饱腹小肠模拟液、pH 6.5的空腹小肠模拟液和pH 7.4的磷酸盐缓冲液16 mL,受体室中精密加入Accepter Sink Buffer 16 mL,转子速度200 r·min^-1,采集时间180 min,测定各介质中原料和原料与硬脂富马酸钠混合物中原料的渗透性,以及参比和仿制制剂粉末中原料的渗透性,通过双侧t检验考察是否有显著性差异,以评估处方中新增辅料和其他变更辅料对原料的影响;采用Macro Flux^TM系统,在溶出杯中加入pH 5.0和pH 6.5的肠模拟液1 000 mL作为溶出介质,使用桨法转速为75 r·min^-1,受体室中精密加入Accepter Sink Buffer 12 mL,微搅拌棒的转速为450 r·min^-1,分别取参比制剂和仿制制剂1片置溶出杯中,测定制剂的溶出-渗透曲线,比较溶出曲线相似性,计算渗透速率(J_Flux)和终点时的药物累计渗透量(AMT),以2种制剂J_Flux和AMT几何均值比值的90%置信区间是否落在80%~125%范围内为依据,预测制剂的生物等效性。结果:左氧氟沙星在不同介质的溶解性为16.4~62.7 mg·mL^-1,其渗透性在pH 5.0的饱腹小肠模拟液、pH 6.5的空腹小肠模拟液和pH 7.4的磷酸盐缓冲液中分别为2.92×10^-6、1.01×10^-5和1.07×10^-5 cm·s^-1;加入硬脂富马酸钠后与原料的渗透性相比无显著差异(P＜0.05),参比和仿制制剂粉末中原料渗透性无显著差异(P＜0.05);2种制剂的溶出曲线相似,J_Flux和AMT几何均值比值的90%置信区间结果均在限度范围之内。结论:左氧氟沙星为BCSⅠ类药物,处方变更后的辅料均不影响原料的渗透吸收,仿制与参比制剂生物等效,国产仿制制剂满足生物等效性豁免的核心要求。基于PAMPA的生物等效性研究,可用于原料的渗透性研究、处方的筛选和优化以及制剂的生物等效性预测等,能有效降低仿制药开发的成本和时间,加速高质量药品的研发。

目的:建立能够鉴别川贝母及其混伪品平贝母的方法。方法:使用化学计量学技术对样品四极杆串联飞行时间(Q TOF)质谱仪测定数据进行分析,并结合三重四极杆质谱筛选出特征离子对为m/z 578.3→164.14和m/z 578.3→398.31。采用Waters Acquity UPLC CSH(75 mm×2.1 mm,1.7 μm)色谱柱,以乙腈-0.1%甲酸溶液为流动相,流速0.4 mL·min^-1。三重四极杆质谱仪MRM模式检测m/z 578.3→164.14和m/z 578.3→398.31 2个离子对。结果:108批样品的验证结果表明,m/z 578.3→164.14和m/z 578.3→398.31 2个特征离子对能够有效区分川贝母及其混伪品平贝母。结论:方法有较好的专属性和灵敏度,可用于平贝母掺伪川贝母的检测。

目的: 建立超高效液相色谱-串联质谱(UPLC-MS/MS)同时测定蔗糖中47种农药残留量的方法。方法: 蔗糖样品经酸性乙腈提取,氮气吹干浓缩,采用LC-MS/MS 进行分析检测,在多反应检测模式(MRM)下,用空白基质标准曲线-内标法进行定量。结果: 各待测物质在一定浓度范围内线性良好(r>0.995),检测限为0.01~2.00 μg·kg^-1。分别在蔗糖样品中添加47 种农药标准溶液10、25、50 μg·kg^-1,进行标准添加回收试验,方法回收率为71.0%~106.0%,重复性RSD为0.90%~8.5%。15批蔗糖样品中2批检出噻虫嗪、噻虫胺,其余均未检出。结论: 该方法具有前处理简单快捷、灵敏、准确等优点,符合农药残留检测要求,满足蔗糖中农药残留检测需要,可用于蔗糖的质量控制。

目的:建立紫外双波长法测定西藏马铃薯淀粉中直链淀粉和支链淀粉的含量。方法:按照双波长测定的等吸收点作图法确定西藏马铃薯直链淀粉和支链淀粉测定波长分别为623、557 nm,参比波长分别为498、729 nm,对收集的11批次淀粉样品进行含量测定及分析。结果:直链淀粉、支链淀粉质量浓度分别在0~66、0~90 μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.999 9、0.999 8),6份样品中直链淀粉和支链淀粉的平均加样回收率分别为102.8%(RSD=1.8%)、98.5%(RSD=2.2%),精密度(RSD=0.071%、RSD=0.31%)、重复性(RSD=0.26%、RSD=2.4%)、稳定性(RSD=0.14%、RSD=1.4%)均符合规定。西藏马铃薯淀粉中直链淀粉、支链淀粉含量分别为36.74%、45.87%,与市售马铃薯淀粉相比,西藏马铃薯淀粉的直链淀粉含量显著性增高(P<0.001),支链淀粉含量显著性降低(P<0.05)。结论:经方法学验证,该方法可用于西藏马铃薯淀粉的质量评价,西藏马铃薯淀粉与市售的马铃薯淀粉的直链淀粉、支链淀粉含量存在显著性差异,本法为西藏马铃薯淀粉的质量标准建立以及高值产品开发提供了实验依据。

目的:建立尺寸排阻色谱-示差折光-多角度激光光散射检测器联用(size exclusion chromatography-refractive index-multiangle laser light scattering,SEC-RI-MALLS)测定甘露聚糖肽原料药和制剂分子量及分子量分布的方法。方法:采用SEC-RI-MALLS联用技术,以0.05 mol·L^-1硫酸钠溶液为流动相,Shodex OHpak SB-804 HQ为色谱分离柱,在流速0.5 mL·min^-1,柱温35 ℃的条件下对甘露聚糖肽分子量及其分布进行专属性、准确度、精密度、耐用性方法学验证,并与现行质量标准方法进行比较。结果:片剂辅料淀粉对测定无干扰,右旋糖酐标准品实测值同标示值的准确度相对误差<3.0%;当样品配制浓度为2 mg·mL^-1时精密度最好,RSD为0.40%;重现性、耐用性RSD均不大于5.0%。79批次样品采用Shodex OHpak SB-804 HQ 色谱柱和TSK-GEL G4000 PW_XL色谱柱进行测定,结果无显著性差异。SEC-RI-MALLS法比甘露聚糖肽国家标准方法 (GPC法)的结果平均高19 509 Da,且分子量分布更为集中。结论:SEC-RI-MALLS法无需标准品就能够测定甘露聚糖肽分子量及其分布,结果准确,耐用性好,与现行方法相比,更有利于该品种的安全性、有效性控制。