2016年, 第36卷, 第2期　
刊出日期：2016-02-25

  

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综述专论
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  对照提取物在中药整体质量控制中的应用

  陈沛, 金红宇, 孙磊, 逄瑜, 马双成

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 185-195. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.01

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  基于中医理论指导下的全面药效物质基础研究是中药质量标准体系构建的基石,对照提取物法为其提供了一种新的分析思路。本文综述了定性和定量对照提取物在中国药典2010年版、美国药典36版、欧洲药典8.0和日本药局方16版中的应用,提出了对照提取物的制备流程,分析了该方法在研究中存在的问题,并以大黄定性对照提取物和重楼总皂苷定量对照提取物为例,阐述了对照提取物在中药整体质量控制中的应用,为对照提取物法的后续研究及实现中药整体质量控制提供了有益的参考。
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  表面等离子共振生物传感器在中药活性分析中的应用

  陈朗东¹, 曹岩², 朱臻宇³, 柴逸峰¹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 196-201. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.02

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  表面等离子共振生物传感器技术是一种新型的光学分析技术。该技术具有专属性强,无标记,灵敏度高,所需样品少等优点,近年来得到了广泛的关注。目前,在中药研究领域,表面等离子共振生物传感器技术被应用于靶标确认、定量分析、蛋白结合位点研究和先导化合物研究等方面。本文介绍了表面等离子共振生物传感器技术的基本理论,并对表面等离子共振生物传感器技术在中药活性分析领域的研究进展和应用前景作一综述。
代谢分析
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  双黄连冻干粉透过人胎盘屏障的药物成分研究

  赵丽颖^1,2, 宋殿荣³, 郭洁³

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 202-207. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.03

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  目的:建立中、晚期人胎盘屏障体外模型,采用高效液相色谱技术,研究双黄连冻干粉透过人胎盘屏障的药物成分。方法:采用Ussing chamber技术建立中、晚期人胎盘屏障体外模型,预平衡30 min后,分别于母体池加入不同浓度双黄连冻干粉溶液,60 min后在胎儿池取样,应用高效液相色谱技术,分析样品中所含药物成分。色谱柱为Zorbax-C₁₈,流动相为乙腈-1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为1.0 mL·min^-1,检测波长为280 nm,柱温为25℃,进样量为10 μL。结果:双黄连冻干粉透过妊娠中期人胎盘屏障体外模型样品中未检测到待测成分,透过妊娠晚期人胎盘屏障体外模型样品中检测到黄芩苷、连翘苷、木犀草素和汉黄芩苷。结论:妊娠晚期应用双黄连冻干粉可造成胎儿宫内暴露,对其胎盘透过液的胚胎毒性研究将成为评价双黄连冻干粉妊娠期应用安全性的关键。
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  UPLC-MS/MS法同时检测人血浆中6种抗结核药的浓度

  安静¹, 董占军¹, 张笑丹², 刘洪涛¹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 208-216. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.04

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  目的:建立UPLC-MS/MS法用于人血浆中6种抗结核药的同时检测分析,并应用于肺结核患者血药浓度监测。方法:利用蛋白沉淀法将被分析物与生物基质分离,采用Waters ACQUITY UPLC HSS T3(1.8 μm,2.1 mm×100 mm)色谱柱进行色谱分离,以乙腈-15 mmol·L^-1甲酸铵-0.05%甲酸为流动相进行梯度洗脱,流速为0.2 mL·min^-1,柱温40℃,进样量5 μL;采用电喷雾离子源正离子模式,多反应监测进行测定。结果:乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺、利福平、利福喷丁、利福布汀质量浓度分别在0.05~5、0.1~10、0.2~20、0.05~10、0.05~10、0.05~5 μg·mL^-1范围内线性关系良好,相关系数均大于0.99。除吡嗪酰胺在低浓度点的日间精密度小于15.4%外,其他化合物低、中、高3个浓度的日内和日间精密度RSD均小于15%,准确度为88.1%~109.1%,准确度良好。结论:本法经方法学验证,可同时对6种以上抗结核药物进行检测,一步完成,降低了分析成本,为临床调整用药提供了重要的分析手段。
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  阿司匹林肠溶片生物等效性试验

  高志峰, 赵媛媛, 周杰

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 217-225. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.05

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  目的:测定健康男性受试者口服单剂量阿司匹林肠溶片(受试制剂)与市售阿司匹林(参比制剂)血浆中水杨酸的浓度,研究受试制剂与参比制剂的吸收速度、吸收程度和体内的相对生物利用度,评价受试制剂与参比制剂是否具有生物等效性。方法:采用双周期随机交叉设计,液相色谱-质谱联用法(HPLC-MS)测定血浆中阿司匹林的有效代谢物水杨酸的药物浓度。HPLC-MS条件:采用MG PAKC₁₈色谱柱(150 mm×2.0 mm,5.0 μm),以乙腈(含0.1%甲酸)-水(含0.1%甲酸)(70:30)为流动相,流速0.3 mL·min^-1。负离子选择反应方式监测;水杨酸反应离子m/z 137.0→93.1;内标(硝西泮)反应离子m/z 280.0→252.0。用DAS 2.1.1药动学软件进行评价。结果:2种制剂水杨酸的AUC_0-t和C_max均拒绝生物不等效假设。受试制剂AUC_0-t的90%置信区间为参比制剂相应参数的96.6%~112.9%;C_max的90%置信区间为参比制剂相应参数的93.2%~112.2%,均落在等效范围内。水杨酸的T_max经非参数秩和检验,两制剂T_max的差异无统计学意义。结论:2种制剂在体内具有生物等效性。
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  在线固相萃取LC-MS/MS法测定人全血中依维莫司浓度的不确定度评定

  吴吉¹, 吴国兰², 申屠建中²

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 226-233. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.06

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  目的:评定在线固相萃取LC-MS/MS法测定人全血中依维莫司浓度的不确定度。方法:对全血依维莫司浓度测定过程中各影响因素,包括测定精密度、称量、对照品溶液的配制、标准含药全血样品的配制、在线固相萃取、仪器、标准曲线拟合等进行分析评定,用A类评定程序评价了分析过程中随机效应引起的不确定度,用B类评定程序评价了分析过程的其他因素引起的不确定度,最后根据各分量计算出合成不确定度并进行了扩展计算各变量的不确定度和合成不确定度,最终计算扩展不确定度。结果:人全血中低(0.520 ng·mL^-1),中(4.99 ng·mL^-1),高(84.99 ng·mL^-1)质量浓度依维莫司的扩展不确定度分别为0.056、0.40、7.16 ng·mL^-1(P=95%,k=2)。结论:在线固相萃取LC-MS/MS法测定人全血中依维莫司浓度的不确定度主要由提取回收率(尤其是低浓度)、对照品溶液配制、仪器允差及测定精密度引入。
生物检定
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  隐匿管状线虫分子鉴定和国内实验动物感染调查

  高正琴, 岳秉飞

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 234-242. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.07

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  目的:对无特定病原体(specific pathogen-free,SPF)和清洁级实验动物隐匿管状线虫进行分子鉴定和感染调查,为实验动物国家标准的修订提供参考依据。方法:4649只SPF实验动物(包括小型猪25只,猴5只,兔40只,地鼠296只,豚鼠186只,大鼠438只,小鼠3629只,鸡25只,鸭5只)和1304只清洁级实验动物(包括兔3只,地鼠26只,豚鼠147只,大鼠229只,小鼠897只)来自全国不同的厂家。应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,对实验动物的隐匿管状线虫进行筛查。应用多重聚合酶链式反应(PCR)和测序技术,鉴定分离自实验动物的隐匿管状线虫cox 1(细胞色素C过氧化物酶亚基1)、cyt b(细胞色素b)、nad 1(NADH脱氢酶亚单位1)、nad 5(NADH脱氢酶亚单位5)、rrn L(核糖体RNA大亚基)和28S rRNA(28S核糖体RNA)基因,从分子水平上确证隐匿管状线虫感染。结果:应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,从实验动物中检出数量众多隐匿管状线虫的虫卵、幼虫和成虫。根据隐匿管状线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种。应用多重PCR测序技术,能从分离自实验动物的单个隐匿管状线虫的虫卵、幼虫和成虫中鉴定出cox 1、cyt b、nad 1、nad 5、rrn L和28S rRNA基因,与其他不同种属的寄生虫无交叉反应。在研究中,通过对确定的阳性样本测序保证了引物的特异性,探究了隐匿管状线虫分离株间核苷酸的可变性,排除了可能由于鼠管状线虫和四翼无刺线虫造成的假阳性结果。应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术,从4649份SPF实验动物和1304份清洁级实验动物样本中分别检出隐匿管状线虫阳性样本96份和35份。应用多重PCR和测序技术,鉴定证明这些阳性样本中确实含有隐匿管状线虫特异性的DNA。测序结果显示,自不同SPF实验动物和清洁级实验动物分离获得的隐匿管状线虫的cox 1、cyt b、nad 1、nad 5、rrn L和28 s rRNA部分基因序列核苷酸相似性达100%。SPF实验动物和清洁级实验动物的隐匿管状线虫感染率分别为2.1%和2.7%。结论:应用直接镜检实时动态显微视屏摄录技术联合多重PCR测序技术能够快速精准检测鉴定出隐匿管状线虫。实验动物常会感染一些人兽共患寄生虫,隐匿管状线虫的人兽共患本质可以视作为公共卫生的一个预警。本研究首次对中国SPF和清洁级的实验动物隐匿管状线虫进行了分子鉴定和感染调查。
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  多重PCR-毛细管电泳法检测Y染色体微缺失

  曲守方¹, 于婷¹, 林斯里², 滕乐², 高尚先¹, 黄杰¹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 243-248. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.08

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  目的:对多重PCR-毛细管电泳法检测Y染色体微缺失进行评价。方法:选择Y染色体无精子因子(AZF)区域的15个序列标签位点(STS),设计特异性的引物,分成4个不同的多重PCR体系。首先提取临床外周全血样本的基因组DNA。将样本的DNA分别加入到4个不同的PCR体系中进行扩增。将获得的目的DNA片段进行毛细管电泳,并根据预设的AZF marker计算出各检测位点的碱基长度,然后分析临床样本的Y染色体微缺失情况。结果:该方法能够准确检测出临床样本的Y染色体AZF a区域缺失、AZF b区域缺失和AZF c区域缺失等缺失;检测限约为3 ng·反应^-1;正常男性临床样本的检测结果是均未发生Y染色体微缺失;在210例无精子症和少精子症患者中,该方法能够准确检测出19例AZF区域微缺失,包括AZF a区域缺失1例,AZF b区域缺失2例,AZF c区域缺失13例,AZF bc区域缺失1例和AZF abc区域缺失2例。结论:多重PCR-毛细管电泳法具有很好的临床适用性,在临床上可以用于Y染色体微缺失检测,为临床遗传咨询提供建议。
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  新型抗胃泌素17疫苗的体液免疫原性与抗原性研究

  贺庆¹, 高华¹, 高濛², 戚胜美², 王军志¹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 249-254. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.09

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  目的:研究一种新型胃泌素17抗原表位结合破伤风类毒素蛋白载体疫苗的体液免疫原性与抗原性,为该疫苗的免疫学药效作用提供参考。方法:疫苗以方案(0.5 mg·只^-1×免疫1次·2周^-1×免疫3次,i.m)对新西兰大白兔(雌性,n=6)进行免疫,以酶联免疫吸附实验(ELISA)检测免疫开始后第4、6、8周动物血清内IgG抗体滴度;以竞争性ELISA法检测各类人源蛋白[酰胺化胃泌素17(amidated-G17)、甘氨酸延伸型胃泌素17(gly-G17)、酰胺化胃泌素34(amidated-G34)、血管活性肠肽(VIP)]对疫苗抗体结合抗原的抑制率。结果:免疫开始后第4周所有动物体内均可检测到抗体滴度,第6周抗体滴度达到最大值(P<0.05vs第4周),第8周抗体滴度恢复至第4周水平(P>0.05vs第4周);随上述蛋白浓度升高(10^-4、10^-3、10^-2、10^-1、10⁰、10¹、10² μmol·L^-1),amidated-G17、gly-G17对抗体结合抗原的抑制率均显著升高,其抑制率分别为11.1%、14.8%、20%、26.5%、45%、74.5%、80.8%,11.6%、15.8%、19.1%、25.3%、45.3%、73%、78.2%;而amidated-G34、VIP对抗体结合抗原的抑制率均接近0%。结论:该新型抗胃泌素17疫苗(G17-TT)具有较好的体液免疫原性与抗原性。
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  采用RAPD技术对人参属的亲缘关系和鉴别的分析

  刘丽^1,2, 肖炳燚², 聂平², 罗晖明², 丁野², 舒毕琼², 孙辉², 李玲², 李文莉^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 255-260. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.10

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  目的:分析人参属3种植物的亲缘关系及其可用于鉴别的特异性DNA片段。方法:采用随机扩增多态性DNA分子标记技术(RAPD)对人参属3种药材的基因组DNA进行多态性分析,筛选特异性片段并进行切胶回收、克隆及测序。结果:从120条随机引物中筛选出12条随机引物用于聚合酶链式反应(PCR)扩增,共扩增出111条扩增片段,其中多态性位点107,多态性百分率为96.40%;从聚类分析图可以看出:人参与西洋参的种间亲缘关系最近,聚为一类,而三七相对其他2种较远,单独聚为一类;将筛选出的显性标记的特异性片段进行切胶回收、克隆并测序获得其DNA序列。结论:aRAPD标记技术从分子水平提示了人参属3种植物的亲缘关系,并为后期的特异性鉴别提供基础。根据序列设计用于鉴别人参、西洋参、三七的特异性PCR引物,实现从理论研究向药材鉴别实际运用的转变。
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  板蓝根类制剂抑菌生物效价测定方法的研究

  阮健, 陈彤

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 261-266. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.11

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  目的:研究板蓝根微生物检定法的适用剂量范围,建立其对敏感菌株的剂量效应曲线,并且根据板蓝根量效曲线测定不同厂家板蓝根片的效价,从而建立板蓝根和板蓝根片的质量标准。方法:采用菌敏试验(最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定)考察板蓝根水提液对5种标准菌株(伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌)的抑菌性。利用不同浓度板蓝根提取液对敏感菌的抑菌圈直径大小和浓度的关系建立标准曲线,构建适用于板蓝根的生物检定法,通过测定不同厂家产地的板蓝根和板蓝根片的抑菌圈直径,代入量效曲线计算它们的生物效价。结果:抑菌实验表明,板蓝根对伤寒沙门氏菌、乙型副伤寒沙门氏菌、福氏志贺氏菌、大肠杆菌及枯草芽孢杆菌等多种菌敏感,其中枯草芽孢杆菌的抑菌圈边缘清晰,敏感度较高。当板蓝根的质量浓度在0.029~0.136 g·mL^-1范围内时,对数浓度与反应效应呈线性关系,且相关性好(r=0.9912)。板蓝根在高、中、低浓度的回收率在90.0%~110.0%范围内,可信限率均在10%以内,RSD为3.7%。结论:采用微生物检定法建立板蓝根、板蓝根片的质量控制方法是可行的,它可以有效配合传统检验方法对板蓝根药材及其制剂进行质量监控。
成分分析
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  超临界流体色谱法测定蛋黄卵磷脂中的8种磷脂组分

  王迎春^1,3, 郑璐侠^2,3, 许旭¹, 陈钢³, 陈桂良³, 杨新磊⁴

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 267-272. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.12

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  目的:建立超临界流体色谱法分离并测定蛋黄卵磷脂中的三棕榈酸甘油酯(TG)、胆固醇(CH)、磷脂酰乙醇胺(PE)、溶血磷脂酰乙醇胺(LPE)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰胆碱(PC)、鞘磷脂(SM)、溶血磷脂酰胆碱(LPC)8种磷脂组分。方法:采用Zorbax Silica色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm)与LiChrosphere100 Diol色谱柱(250 mm×4 mm,5 μm)串联,以二氧化碳为流动相A,甲醇-氨水(100:0.5)为流动相B,进行梯度洗脱,流速为2.3 mL·min^-1,柱温为30℃,进样量为5 μL,二氧化碳补偿液(甲醇)流速为0.2mL·min^-1,蒸发光散射检测器检测,漂移管温度为90℃,雾化气流速为1.2 L·min^-1。结果:8种磷脂组分分离完全,且峰面积与浓度的双对数线性关系良好,日内精密度RSD为0.2%~2.0%,日间精密度RSD为0.5%~2.0%,检测限为0.137~0.584 μg,定量限为0.273~1.169 μg,加样回收率为97.1%~100.6%,RSD为1.1%~2.7%,测得3批蛋黄卵磷脂中的TG为1.6%~1.8%,CH为0.4%~0.5%,PE为7.8%~8.9%,LPE为0.7%~0.9%,PI为0.9%~1.1%,PC为79.1%~83.0%,SM为1.4%~1.5%,LPC为1.6%~1.7%。结论:本文建立的方法可用于蛋黄卵磷脂的质量控制。
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  酒女贞子HPLC指纹图谱的建立及多成分含量的测定

  吴修红, 孙泽, 杨恩龙, 于丹, 吴军凯, 阎雪莹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 273-277. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.13

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  目的:建立酒女贞子饮片的HPLC指纹图谱及建立指标成分含量测定的方法,为酒女贞子饮片的质量控制提供参考。方法:采用ODS C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-水为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL·min^-1,检测波长230 nm,建立酒女贞子HPLC指纹图谱,并对红景天苷、齐墩果酸、木犀草素及特女贞苷指标成分的含量测定方法进行方法学考察。结果:红景天苷、齐墩果酸、木犀草素及特女贞苷线性范围分别为0.464~2.320、0.204~4.080、0.041~0.205和0.620~3.100 μg,线性关系良好(r>0.9998)。使用外标法测定红景天苷、齐墩果酸、木犀草素和特女贞苷含量分别在2.648~4.681、5.082~11.770、0.059~0.107和5.158~12.25 mg·g^-1范围内。取10个收集地酒女贞子饮片建立HPLC指纹图谱,以木犀草素峰为参比峰,样品相似度与对照图谱相似度均≥0.95,说明各地出售的酒女贞子饮片质量相对稳定。结论:该方法简便快速,分离效果好,重复性好,可为规范及评价酒女贞子质量及同属植物的研究提供参考。
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  HPLC-UV-ELSD联用同时测定痰热清注射液中6种成分的含量

  冯素香^1,2, 赵迪¹, 郝蕊¹, 周悌强¹, 王蒙蒙¹, 李建生^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 278-284. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.14

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  目的:建立HPLC-UV-ELSD联用法同时测定痰热清注射液中6种有效成分(原儿茶酸,绿原酸,咖啡酸,黄芩苷,熊去氧胆酸,鹅去氧胆酸)的含量。方法:在相同色谱条件下,采用不同检测器同时测定痰热清注射液中6种有效成分,HPLC-UV法测定原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、黄芩苷,HPLC-ELSD测定熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸。采用Venusil XBP-C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈(A)-4%醋酸水(B)为流动相,线性梯度洗脱,流速为1 mL·min^-1,紫外检测波长300 nm,ELSD漂移管温度70℃。结果:原儿茶酸、绿原酸、咖啡酸、黄芩苷、熊去氧胆酸、鹅去氧胆酸质量浓度分别在0.02~0.42 μg·mL^-1(r=0.9996)、0.31~6.12 μg·mL^-1(r=0.9993)、0.59~11.84 μg·mL^-1(r=0.9991)、33.24~664.75 μg·mL^-1(r=0.9996)、32.02~640.50 μg·mL^-1(r=0.9994)和5.58~111.60 μg·mL^-1(r=0.9998)范围内呈良好的线性关系;平均回收率在97.8%和101.5%之间。结论:该方法专属性强,耐用性好,可用于痰热清注射液中6种成分的含量测定和质量控制。
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  HPLC法同时测定维吾尔药材百里香中6种成分的含量

  成杰¹, 杨鹏飞¹, 何康¹, 陈曲², 刘冲³

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 285-290. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.15

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  目的:建立HPLC法同时测定维吾尔药材百里香中绿原酸、咖啡酸、百里香酚、芦丁、迷迭香酸和蒙花苷的含量。方法:采用Agilent ZORBX SB-C₁₈色谱柱(250 mm×4.60 mm,5 μm),以乙腈(A) -0.2%磷酸水溶液(B)为流动相,梯度洗脱(0~10 min,90%B→85%B;10~16 min,85%B→80%B;16~25 min,80%B→50%B;25~35 min,50%B→30%B;35~40 min,30%B→20%B;40~45 min,20%B→10%B;45~60 min,10%B→90%B),流速1.0 mL·min^-1,检测波长300 nm,柱温30℃,进样量10 μL。结果:绿原酸、咖啡酸、百里香酚、芦丁、迷迭香酸和蒙花苷线性范围分别为0.033~0.198 mg·mL^-1(r=0.9999)、0.034~0.204 mg·mL^-1(r=0.9999)、0.008~0.048 mg·mL^-1(r=0.9997)、0.0155~0.093 mg·mL^-1(r=0.9996)、0.0302~0.1812 mg·mL^-1(r=0.9991)和0.0901~0.5406 mg·mL^-1(r=0.9994),加样回收率在99.25%~101.4%之间,RSD为0.8%~1.9%。3批百里绿原酸5.009、5.106、5.185 mg·g^-1,咖啡酸4.006、4.152、4.220 mg·g^-1,香药材中百里香酚含量分别为1.024、1.036、1.106 mg·g^-1,芦丁1.822、1.863、1.879 mg·g^-1,迷迭香酸7.004、7.054、7.164 mg·g^-1,蒙花苷20.001、20.16、20.926 mg·g^-1。结论:该方法专属性强,能够快速、准确地测定百里香药材中6种指标性成分含量,为更好地控制维吾尔药材百里香的质量并评价其药用价值提供科学数据。
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  HPLC同时测定黄花列当中3个苯乙醇苷的含量

  李彩峰, 温爱平, 王晓琴, 韩国庆

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 291-295. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.16

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  目的:建立HPLC法同时测定黄花列当中3个苯乙醇苷类化合物(毛蕊花糖苷、crenatoside、2'-乙酰毛蕊花糖苷)的含量。方法:采用Inertsil C₁₈(4.6 mm×250 mm,5.0 μm)色谱柱,乙腈-0.1%磷酸水溶液(22:78)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,柱温25℃,检测波长330 nm。结果:毛蕊花糖苷、crenatoside和2'-乙酰毛蕊花糖苷在30 min内得到良好的分离,且进样量分别在0.104~5.20 μg(r=0.9998)、0.106~2.65 μg(r=1.0000)、0.058~1.15 μg(r=1.0000)范围内呈现良好线性;平均回收率(n=3)在96.24%~102.7%之间。13批黄花列当样品中毛蕊花糖苷、crenatoside、2'-乙酰毛蕊花糖苷3种成分的含量范围分别为1.40%~11.53%、1.35%~3.22%和0.15%~1.63%,其中含量高的2个成分是毛蕊花糖苷和crenatoside;不同产地的药材成分含量差异较大。结论:本方法操作简便,准确、重现性良好,可用于黄花列当药材和饮片的质量检测。
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  中空纤维分离-高效液相色谱法测定氧氟沙星凝胶剂的含量

  冉丛聪¹, 豆妮娜², 李青莲¹, 蒋晔¹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 296-300. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.17

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  目的:建立中空纤维离心超滤前处理方法结合高效液相色谱法测定氧氟沙星凝胶剂的含量。方法:凝胶样品经中空纤维离心超滤技术进行纯化,滤除样品溶液中的高分子辅料后,采用HPLC法测定氧氟沙星凝胶剂的含量。采用C₁₈柱,流动相为甲醇-水(30:70,含0.5%的三乙胺,用磷酸调节pH至4.0),流速1.0 mL·min^-1,柱温为室温,检测波长为293 nm。考察不同溶剂对样品含量测定的影响以及中空纤维膜的非特异性吸附。结果:以1 mL的0.1 mol·L^-1盐酸溶液中和凝胶,然后用水稀释制备样品溶液,采用聚偏氟乙烯中空纤维膜对样品进行超滤处理后,对氧氟沙星不存在非特异性吸附且有效去除了高分子凝胶辅料的干扰。氧氟沙星质量浓度在5.10~51.0 μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9998);样品平均回收率为100.4%,RSD不大于1.7%。结论:本法经方法学验证,可用于氧氟沙星凝胶剂的含量测定。
安全监测
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  超高效液相色谱串联质谱法检测鸡蛋中残留的氨基糖苷类药物

  徐丽佳, 刘笑, 张秀芹, 刘敬先, 苗翠

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 301-305. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.18

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  目的:建立鸡蛋中5种氨基糖苷类药物残留的UPLC-MS/MS检测方法。方法:样品经磷酸盐缓冲液提取,调节pH后,过C₁₈固相萃取小柱净化,氮气吹干后七氟丁酸溶液复溶,进行UPLC-MS/MS分析。色谱柱:BEH C₁₈(50 mm×2.1 mm,1.7 μm);流动相:20 mmol·L^-1七氟丁酸乙腈(A) -20 mmol·L^-1七氟丁酸水溶液(B),梯度洗脱(0~2 min,4% A线性变化至30% A;2~4 min,30% A线性变化至60% A;4~5 min,60% A线性变化至96% A;5~5.5 min,96% A线性变化至4% A;5.5~7.0 min,维持4% A);流速:0.3 mL·min^-1;柱温:30℃;进样量:10 μL。结果:5种氨基糖苷类药物质量浓度在200~1000 ng·mL^-1范围内呈现良好的线性关系,相关系数r均大于0.995;添加500 ng·g^-1时回收率范围为67.9%~79.4%,批内RSD范围为1.03%~4.08%,批间RSD范围为7.77%~16.50%;方法检测限为5 μg·kg^-1,定量限为20 μg·kg^-1。20份实际鸡蛋样品中均未检出5种氨基糖苷类药物。结论:经方法学验证,本方法可用于鸡蛋中氨基糖苷类药物的检测。
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  HPLC-PDA和UPLC-Q/TOF_MS法筛查氟苯尼考粉中添加化合物

  韩宁宁¹, 毕言锋¹, 刘少伟², 徐嫄¹, 于丽娜¹, 赵晖¹, 郝利华¹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 306-312. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.19

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  目的:鉴定1批监督抽检的兽药氟苯尼考粉中的未知添加物。方法:在采用HPLC法对该批检品进行含量测定时,发现其含有未知添加物,采用常规HPLC-PDA法及UPLC-MS法对其进行筛查,均无法确定未知物结构。通过制备液相色谱将未知添加物进行纯化,再将纯化后的未知物利用UPLC-Q/TOFMS和HPLC-PDA给予的信息进行结构推断,最后再通过上述2种方法对推断进行验证,最终鉴定出该未知添加物的结构。结果:该批检品中的未知添加物为苯甲酸。结论:通过总结上述推导与验证过程,归纳出了未知物筛查的模式化路线,为日后兽药处方外非法添加筛查提供了可以借鉴的思路。
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  离子迁移谱法快速检测保健食品中添加的5型磷酸二酯酶抑制剂

  冯雪, 尹利辉, 金少鸿, 朱俐

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 313-320. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.20

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  目的:建立快速检测保健食品中非法添加的西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂的离子迁移谱方法。方法:采用离子迁移谱正离子模式检测西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂,离子源电压为2.5 kV,迁移管电压为7.5 kV,进气口温度和迁移管温度均为180℃。利用所建立方法对20批市售缓解体力疲劳类保健食品进行非法添加筛查,并通过LC-MS进行确认。结果:7种5型磷酸二酯酶抑制剂迁移时间在13.8~16.2 ms之间,检出限为0.05~2 μg·mL^-1。20批市售样品中13批检出西地那非,2批检出他达拉非,2批同时检出西地那非与他达拉非,与LC-MS检测结果一致。结论:离子迁移谱检测方法快速、灵敏,可以作为缓解体力疲劳类保健食品中非法添加的西地那非、那红地那非、他达拉非、氨基他达拉非、伪伐地那非、那莫西地那非、二乙胺他达拉非7种5型磷酸二酯酶抑制剂的快速初筛方法。
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  离子迁移谱快速检测改善睡眠类保健品中非法添加的巴比妥类药物

  焦建东¹, 李俊卿¹, 王金凤², 李启红¹, 尹利辉³, 权勤波¹, 朱俐³, 郭常川⁴, 陈金泉¹

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 321-329. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.21

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  目的:采用离子迁移谱(ion mobility spectrometry,IMS)技术,建立改善睡眠类保健品中苯巴比妥、异戊巴比妥、司可巴比妥的非法添加快速检测方法。方法:采用离子迁移谱技术,设定条件为负源,离子源电压1.9 kV,漂移管电压7.5 kV,进气温度180℃,漂移管温度180℃,栅电压45 V,栅脉冲宽度120 μs,漂移管流速1.2 L·min^-1,排气泵0.8 L·min^-1,运行时间30 s,光谱范围25 ms;样品经甲醇提取,直接进样,与对照品的迁移时间进行比对分析,判断是否有巴比妥类药物的非法添加。结果:可以实现单独存在一种巴比妥类化合物时的检测鉴定,并根据信噪比(S/N)≥3确定出3种非法添加巴比妥类化合物的最低检出限;多种化合物同时存在时,可以有效地实现苯巴比妥与另2种物质的分离鉴别,而对异戊巴比妥与司可巴比妥无法实现分离鉴定。在改善睡眠类保健食品中检出了非法添加的巴比妥类药物,与质谱的鉴定结果完全一致。结论:本方法经方法学验证,可用于改善睡眠类保健品中非法添加巴比妥类药物的初步筛选。
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  依诺沙星制剂有关物质的研究

  黄婧, 吴宏伟, 李玲玲

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 330-338. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.22

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  目的:采用高效液相色谱-三重串联四极杆质谱及超高分辨四极杆傅里叶变换离子回旋共振串联质谱仪对依诺沙星主要有关物质进行结构鉴定。方法:采用高效液相色谱法测定75批依诺沙星制剂中的有关物质,确定含量不低于0.1%的主要杂质。采用Thermo Accucore XL C₁₈色谱柱(4.6 mm×250 mm,4 μm)及高效液相色谱-三重串联四极杆质谱,以0.1%甲酸溶液(含5 mmol·L^-1醋酸铵)-甲醇-乙腈(86:5:9)为流动相A,以0.1%甲酸溶液(含5 mmol·L^-1醋酸铵)-甲醇-乙腈(350:325:325)为流动相B进行梯度洗脱,对依诺沙星有关物质进行分离,并初步测定主要有关物质准分子离子质荷比;采用傅里叶变换质谱法测定有关物质准确母离子及子离子,并结合对照品及裂解规律,对主要有关物质进行结构推定。结果:在所建立的高效液相色谱-三重串联四极杆质谱条件下,依诺沙星及其有关物质可达到良好分离。依诺沙星制剂中3个主要有关物质均具有依诺沙星的1,8-萘啶母核结构。结论:本研究对依诺沙星制剂中的主要有关物质进行了结构鉴定,为改进生产工艺和提高产品质量提供了参考依据。
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  罗氟司特原料药中矿物油残留测定

  田沛^1,2, 杨志强², 张坤², 王杏林², 陈娟^1,2, 赵亚绘^1,2

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 339-345. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.23

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  目的:建立正相液相色谱-蒸发光散射检测法用于罗氟司特粗品、精制中间体和终产品中残留矿物油的检查。方法:以丙酮为溶剂,采用SiO₂正相色谱柱(Welch Materials,4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙醇-正己烷为流动相,梯度洗脱,流速0.8 mL·min^-1;分离后以蒸发光散射检测器(Alltech ELSD2000ES)检测,漂移管温度50℃,载气流速1.4 L·min^-1。外标曲线法计算样品中矿物油含量,以矿物油中所有烷烃组分作为一个整体进行定量分析。结果:矿物油与罗氟司特主药及其他杂质有效分离,专属性良好。矿物油质量浓度在3.24~81.04 μg·mL^-1范围内线性关系良好(r²=0.9970),精密度(RSD)为1.24%,检出限为19.45 ng,定量限为32.42 ng,回收率为90%~110%。结论:本方法可用于罗氟司特原料药中矿物油残留检查并准确测定矿物油残留量,为评价乙醚精制中间体质量,保证终产品残留矿物油的去除提供依据。
标准研讨
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  RP-HPLC法测定去羟肌苷肠溶胶囊有关物质次黄嘌呤及含量

  杜明荦, 张军霞, 秦志国, 仲平

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 346-351. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.24

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  目的:建立反相HPLC法测定去羟肌苷肠溶胶囊有关物质次黄嘌呤及含量。方法:采用InertSurstain C₁₈(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱;以0.386%醋酸铵溶液加氨水调节pH至8.0为流动相A,以乙腈-甲醇(50:50)为流动相B,梯度洗脱,测定去羟肌苷肠溶胶囊有关物质次黄嘌呤;以流动相A-流动相B(90:10)为流动相测定去羟肌苷肠溶胶囊中去羟肌苷含量;检测波长254 nm;流速1.0mL·min^-1;柱温25℃;进样体积为20 μL。结果:在选定的色谱条件下,主成分及其有关物质能完全分离,杂质次黄嘌呤在0.0996~9.960 μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=1.000),平均回收率(n=9)为100.7%(RSD=1.9%),次黄嘌呤与去羟肌苷的相对较正因子为0.62;去羟肌苷在0.2423~48.45 μg·mL^-1范围内呈良好的线性关系(r=0.9996),平均回收率(n=9)为99.9%(RSD=1.4%)。结论:本法经方法学验证,可用于去羟肌苷肠溶胶囊的有关物质检查及含量测定。
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  HPLC法测定草酸艾司西酞普兰片的含量

  纪万里, 要辉, 沈定文

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 352-355. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.25

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  目的:建立高效液相色谱法测定草酸艾司西酞普兰片的含量。方法:采用Amethyst C₁₈-P色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以pH 4.20醋酸钾缓冲液(取醋酸钾14 g,加冰醋酸20.5 mL,加水稀释至1000 mL)-乙腈(72:28)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长236 nm,测定草酸艾司西酞普兰的含量。结果:草酸艾司西酞普兰质量浓度在20~300 μg·mL^-1范围内线性关系良好;平均回收率(n=3)为99.1%~99.4%,RSD为0.25%~0.61%,以每片中艾司西酞普兰计,3批样品的含量分别为99.7%、99.5%、99.5%。结论:本法经方法学验证,可用于本制剂的含量测定及质量控制。
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  NIRS与HPLC指纹图谱技术在玉米须质量分析中的应用

  谢彩侠, 王丽娜, 刘蕊, 谢惠英, 白雁

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 356-361. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.26

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  目的:通过研究近红外光谱(NIRS)与HPLC指纹图谱,选择一种最佳的玉米须质量控制方法。方法:以NIRS光谱判别分析法对不同产地玉米须进行定性鉴别,建立判别分析模型,然后用三重交叉验证法对该模型进行验证;并与HPLC指纹图谱方法(色谱柱为Agilent ZORBAX SB-C₁₈,4.6 mm×250 mm,5 μm;检测波长为273 nm,柱温30℃,进样量为10 μL,流速为0.8 mL·min^-1,以甲醇-0.2%磷酸为流动相进行梯度洗脱)进行对比研究。结果:NIRS判别分析模型将2个产地的玉米须清晰地聚为两类,界限明显;而HPLC指纹图谱相似度分析结果发现:同一产地的样品相似度较高但并未均达到0.9,而不同产地的玉米须样品的相似度并无明显差异;因此,NIRS判别分析结果优于HPLC指纹图谱试验结果,且分析过程简便、快速。结论:利用NIRS光谱判别分析的优点,能够快速、准确地分析玉米须的质量,可以作为玉米须的一种质控方法。
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  利用近红外一致性检验方法验证药品标准物质包装的密闭性

  张琪^1,2, 冯艳春², 宋丹青¹, 胡昌勤², 赵宗阁²

  药物分析杂志. 2016, 36(2): 362-368. https://doi.org/10.16155/j.0254-1793.2016.02.27

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  目的:建立近红外一致性检验方法,用于快速检查药品标准物质组合包装(西林瓶、胶塞、铝塑盖)的密闭性,进而保证国家药品标准物质的质量。方法:选择易引湿的溴化钾作为试验样品,使用积分球方法采集近红外漫反射光谱,以2名不同操作人员测定的未引湿样品光谱为参照光谱,谱图经矢量归一化、一阶导数和17点平滑处理后,在谱段5326~4825 cm^-1和4632~4377 cm^-1建立一致性检验模型,阈值设定为4。在检查西林瓶组合包装密闭性时,将分装有未吸水溴化钾样品且包装完好的玻璃瓶放入密闭92%RH的高湿环境中24 h后,测定其近红外光谱,带入一致性检验模型,通过比较待测光谱与参照光谱的差异来判断其是否引湿,即密闭性是否有问题。结果:应用所建立的一致性检验模型分别预测正常样品和模拟包装密闭性有问题的样品,结果与实际情况一致。结论:所建一致性检验模型可以对组合包装密闭性有问题的样品做出准确的判断,可用于药品标准物质筛选西林瓶、胶塞和组合包装工艺的验证。