2015年, 第35卷, 第2期　
刊出日期：2015-02-25

  

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综述专论
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  抗真菌药物作用靶点机理及新药研发进展

  刘晓环, 张朝晖

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 193-202.

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  抗真菌药物的大量使用导致真菌耐药性的增加,影响了病人的康复甚至威胁生命。开发安全、高效、广谱的新型抗真菌药物尤为重要。本文首先阐述了抗真菌药物的作用机理以及相应作用靶点。作用机理主要分为抑制真菌细胞壁合成与影响细胞膜功能2种),作用靶点(包括细胞壁中的β-葡聚糖合成酶、几丁质合成酶、甘露聚糖及其复合物等,和细胞膜中的脂类、麦角甾醇及其相关酶等)。针对新型抗真菌药物的研发亟待提高速率的现状,本文综述了新型抗真菌药物的发现、发展途径及相关药物分析方法,从海洋资源的开发、中草药提取开发、常规方法的改进,到新兴的计算机辅助药物设计等。综合运用以上方法,结合微量、灵敏、快速药物分析技术,有望推动新型抗真菌药物研发的提速。
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  基于环形谐振器的无标记光学生物传感器

  陈晨¹, 王兆宏², 陈明³

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 203-209.

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  光学生物传感技术将生物分子相互作用转换为可量化的光信号,用以生物医药分析及健康科学等领域。无标记生物传感技术具有直接实时检测等优势,适宜进行高通量实时定量测量,可获得较高的灵敏度。本文介绍基于环形谐振器的若干光学无标记传感器的工作原理、特性、结构和应用。且应用于蛋白质、病毒、细菌制剂等药物时,不会对待测物分子产生结构性和功能性的改变。生物传感器具有良好的应用效果和广阔的前景。
成分分析
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  泽泻提取物三萜类成分含量测定研究

  许文^1,2, 徐明涛², 赵万里², 丘建芳², 李小艳², 罗奋熔², 黄鸣清^1,2, 吴水生²

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 210-217.

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  目的: 建立紫外-可见分光光度法和高效液相色谱法测定泽泻提取物中三萜类成分含量。方法: 采用紫外-可见分光光度法,以5%香草醛(用冰醋酸配制)-高氯酸显色,在555 nm波长处测定吸光度,计算泽泻提取物总三萜含量;应用高效液相色谱法同时测定泽泻提取物中12个三萜类成分,采用Ultimate XB-C₁₈ 色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以乙腈-5%甲醇水为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,检测波长208 nm。结果: 紫外-可见分光光度法测定总三萜含量,以23-乙酰泽泻醇B计,质量浓度在5.9~15.6 μg · mL^-1 范围内与吸光度值呈良好线性关系(r=0.999 1),平均加样回收率99.05%,RSD为2.3%;高效液相色谱法测定12个泽泻三萜类成分含量,在考察的浓度范围内,线性关系良好(r>0.999 0),回收率均在95.89%~99.33%范围内,RSD为2.0%~3.4%。泽泻提取物中12个三萜类成分的含量:泽泻醇A 5.71%~5.95%、泽泻醇B 3.47%~3.99%、泽泻醇C 2.53%~2.97%、泽泻醇G 3.07%~3.93%、泽泻醇L 3.65%~3.99%、23-乙酰泽泻醇A 2.39% ~3.02%、23-乙酰泽泻醇B 10.56%~11.32%、23-乙酰泽泻醇C 9.44%~9.86%、16-羰基-23-乙酰泽泻醇A 0.63% ~3.14%、16-羰基-24-乙酰泽泻醇A 1.08%~1.21%、11-去氧泽泻醇B 2.29%~2.85%、24-乙酰泽泻醇A 4.04% ~5.02%。结论: 经方法学验证,本文建立的紫外-可见分光光度法可以用于检测泽泻提取物中总三萜含量,高效液相色谱法可用于检测泽泻提取物中12个泽泻三萜类成分含量。
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  HPLC法测定化橘红中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量

  裴昆¹, 夏放高², 陈海芳¹, 罗小泉¹, 易徐航¹, 董晶¹, 杨武亮¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 218-221.

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  目的: 建立HPLC法同时测定化橘红药材中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量。方法: 采用DiamonsilC₁₈ 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇(A)-水(B)为流动相,二元梯度洗脱(0~6 min,49%A;6~15 min,49%A→75%A;15~26 min,75%A→100%A;26~30 min,100%A;30~32 min,100%A→49%A;32~35 min,49%A),流速1.0 mL · min^-1,检测波长324 nm,柱温30 ℃。结果: 水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的进样量分别在0.378 0~2.268 μg(r=0.999 7)、0.088 56~0.531 4 μg(r=0.999 7)、0.089 58~0.537 5 μg(r=0.999 8)和0.053 38~0.320 3 μg(r=0.999 9)范围内呈良好的线性关系;平均回收率(n=6)分别为100.6%、101.5%、99.68%、98.93%,RSD为2.9%、2.7%、2.2%、2.3%。12批化橘红样品中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯含量测定结果分别为0.123%~0.452%、0.036%~0.094%、0~0.090%、0~0.035%。结论: 经方法学验证,本法可用于化橘红药材中水合橘皮内酯、橘皮内酯、马尔敏和葡萄内酯的含量测定。
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  HPLC法同时测定双金连合剂中11种成分的含量

  李向阳¹, 屠万倩²

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 222-227.

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  目的: 建立反相高效液相色谱法同时测定双金连合剂中新绿原酸、绿原酸、隐绿原酸、连翘苷、芦丁、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、黄芩苷、牡荆素和黄芩素的含量。方法: 采用Phenomenex ODS C₁₈ 色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以乙腈(A)-0.4%磷酸(B)为流动相,梯度洗脱(0~10 min,5%A→9%A;10~30 min,9%A;30~60 min,9%A→30%A;60~90 min,30%A→50%A),流速1.0 mL · min^-1,最大吸收波长下检测(新绿原酸、绿原酸和隐绿原酸:327 nm;异绿原酸B、A、C:330 nm;芦丁、黄芩苷和黄芩素:280 nm;连翘苷:277 nm;牡荆素:350 nm)。结果: 11种待测成分质量浓度与峰面积在测定范围内均呈良好线性关系(r≥0.999 0),平均回收率为96.7%~101.6%(RSD≤2.8%)。结论: 该方法经方法学验证可为更好地控制双金连合剂的质量提供参考依据。
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  HPLC法同时测定不同来源溪黄草药材中8个水溶性成分的含量

  唐海明¹, 陈建南^1,2, 张扬¹, 赖小平^1,2, 黄松^1,2

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 228-234.

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  目的: 建立同时测定不同品种溪黄草中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁含量的高效液相色谱法,并比较评价溪黄草各品种药材质量。方法: 采用Phenomenex luna C₁₈ (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,流动相为甲醇-0.5%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.8 mL · min^-1,检测波长334 nm;柱温为室温(25 ℃)。结果: 咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁线性范围分别为0.09~2.28、0.13~3.11、0.06~1.38、0.18~4.54、0.08~1.97、0.07~1.71、0.06~1.49、0.05~1.31 μg;平均回收率(n=6)分别为99.7%、99.5%、100.1%、99.0%、98.4%、98.4%、101.8%、99.4%,RSD分别为0.86%、1.8%、1.8%、1.7%、2.0%、1.2%、1.2%、1.4%。狭基线纹香茶菜中咖啡酸、新西兰牡荆苷2、新西兰牡荆苷3、异夏佛塔苷、夏佛塔苷、牡荆苷、芹菜素-6,8-二-C-α-L-吡喃阿拉伯糖苷和芦丁8个水溶性成分含量分别为0.63~0.33、0.88~6.20、0.44~2.41、2.37~11.19、0.75~5.53、0.76~1.83、0.45~1.78、0.00~2.45 mg · g^-1,纤花线纹香茶菜中上述8个水溶性成分含量分别为0.86~3.12、0.76~6.35、0.53~1.47、2.44~11.1、1.96~5.29、0.00~1.82、0.90~5.82、0.00~2.34 mg · g^-1,线纹香茶菜中上述8个水溶性成分含量分别为0.61~2.17、0.77~1.56、0.47~1.82、1.97~6.48、1.69~6.72、0.00~0.56、0.00~3.30、0.00~0.84 mg · g^-1,溪黄草中上述8个水溶性成分含量分别为0.62~1.33、0.00~0.94、0.44~1.33、0.00~2.13、0.18~1.81、0.00~0.50、0.00~1.11、0.00~0.22 mg · g^-1。结论: 本研究所建立的方法能鉴别不同来源的溪黄草药材,可用于溪黄草药材的质量控制。
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  松木层孔菌杂多糖中的3-O-甲基-半乳糖的分析鉴定

  杨开^1,2, 张佳妍¹, 邢辰¹, 金月忠¹, 张安强^1,3, 胡江宁², 孙培龙¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 235-240.

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  目的: 分析鉴定松木层孔菌子实体杂多糖中的未知单糖组分。方法: 松木层孔菌子实体经提取分离纯化得到水溶性均一多糖组分PP80W,HPLC法测定其均一性和分子量。PP80W经水解、还原和乙酰化后采用GC法对照测定其单糖组分,并对其中未知的1个单糖组分采用GC-MS、DEPT-135和2D NMR(¹H-¹H COSY、TOCSY、HMQC、HMBC和NOESY谱)进一步分析鉴定。结果: PP80W相对分子质量为2.99×10³,GC分析发现PP80W由鼠李糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖和1种未知单糖构成,GC-MS和核磁共振分析鉴定该未知单糖为3-O-甲基-半乳糖。结论: PP80W为含有3-O-甲基-半乳糖结构的杂多糖组分。
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  HPLC法同时测定六味能消胶囊中木香烃内酯、去氢木香烃内酯大黄素、大黄酚的含量

  裴贵珍¹, 郭鑫², 张雪峰¹, 甘永祥¹, 张淑兰¹, 漆新文¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 241-245.

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  目的:建立六味能消胶囊中木香烃内酯、去氢木香烃内酯、大黄素、大黄酚4个成分含量测定的方法。方法: 采用Atlantis C₁₈ 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以甲醇-0.1%磷酸水为流动相,梯度洗脱,检测波长225 nm(0~25 min检测木香烃内酯、去氢木香烃内酯)、254 nm(25~40 min检测大黄素、大黄酚),柱温25 ℃。结果: 木香烃内酯、去氢木香烃内酯、大黄素、大黄酚的线性范围分别为0.665 6~33.28、0.563 7~31.84、0.524 8~26.24、0.585 6~29.28 μg · mL^-1;平均回收率(n=6)分别为99.28%(RSD=1.8%),101.7%(RSD=1.6%),101.2%(RSD=2.0%),99.36%(RSD=1.8%)。5批样品中木香烃内酯、去氢木香烃内酯、大黄素、大黄酚含量分别为2.32~2.41、2.48~2.62、0.42~0.48、1.26~1.33 mg · g^-1。结论: 该方法可用于六味能消胶囊中木香烃内酯、去氢木香烃内酯、大黄素、大黄酚的同时测定。
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  HPLC法同时测定玉叶清火胶囊中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯

  唐维宏

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 246-249.

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  目的:建立玉叶清火胶囊中栀子苷、穿心莲内酯和脱水穿心莲内酯含量的液相色谱测定法。方法:采用Waters SunFire^TM C₁₈ 色谱柱(4.6 mm×150 mm,5 μm),以甲醇-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,检测波长为切换波长(0~10 min,238 nm,栀子苷;10~22 min,225 nm,穿心莲内酯;22~35 min,254 nm,脱水穿心莲内酯)。结果:栀子苷进样量在0.148~2.659 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=6),平均回收率(n=9)为99.90%;穿心莲内酯进样量在0.149~2.681 μg范围内线性关系良好(r=0.999 8,n=6),平均回收率(n=9)为99.62%;脱水穿心莲内酯进样量在0.089~1.607 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9,n=6),平均回收率(n=9)为99.53%。结论:本文建立的波长切换高效液相色谱法简便、快捷,可用于该制剂的质量检测。
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  韩信草的高效液相色谱指纹图谱及化学模式识别

  潘伟东, 杜义龙, 赵胜男, 李艳荣, 王肖, 潘海峰

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 250-254.

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  目的: 通过比较指纹图谱的相似度并进行主成分和聚类分析,建立韩信草指纹图谱共有模式。方法: 采用Agilent Eclipse XDB-C₁₈ 色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),以0.6%乙酸水溶液-乙腈-四氢呋喃为流动相,梯度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,1~40 min检测波长为365 nm,40~65 min检测波长为275 nm,柱温30 ℃,进样量10 μL。对16批韩信草进行检测,运用国家药典委员会《中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004A版》建立指纹图谱并进行相似度计算,运用SPSS 17.0统计软件进行化学模式识别分析,建立韩信草指纹图谱共有模式。结果: 根据主成分和聚类分析结果筛选出10批韩信草样品,并建立指纹图谱共有模式。结论: 本文建立的方法经方法验证可作为韩信草的质量控制方法。
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  固相萃取-紫外分光光度法快速测定黄花蒿中青蒿素含量

  郑志福¹, 高平章¹, 林如鹏², 王珊¹, 李国清¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 255-260.

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  目的: 建立固相萃取(SPE)净化后紫外分光光度法(UV)快速测定黄花蒿中青蒿素含量。方法: 黄花蒿干叶粉末中的青蒿素用无水乙醇超声波提取(200 W,40 kHz),最佳提取条件为料液比1:20(g:mL),超声波萃时间15 min,温度25 ℃。提取液0.05 mol · L^-1 氢氧化钠水溶液45 ℃衍生20 min。衍生化后经C₁₈ SPE柱净化,乙醇-0.01 mol · L^-1 磷酸盐缓冲液(pH 5.8)(15:85)洗涤杂质,乙醇-0.01 mol · L^-1 磷酸盐缓冲液(pH5.8)(33:67)洗脱青蒿素衍生物Q₂₅₉。洗脱液用紫外分光光度计259 nm波长处测定。结果: 经高效液相色谱(HPLC)检测,SPE净化后Q₂₅₉ 回收率在98.0%~105.9%;Q₂₅₉ 对λ₂₅₉ 光吸收贡献从26.8%~53.5%提高到92.0%~100%,λ₂₅₉ 有光吸收的杂质基本除去;SPE-UV法与HPLC法相对误差小于10%。结论: SPE-UV法经方法学验证,可作为黄花蒿种植、收购时大量、快速检测黄花蒿中青蒿素含量的检测方法。
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  蛇葡萄素纳米胶束含量与包封率的测定

  黄仁杰, 鄢雪梨, 狄万鹏, 倪峰

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 261-265.

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  目的: 建立蛇葡萄素纳米胶束含量与包封率的测定方法。方法:采用薄膜分散法制备蛇葡萄素纳米胶束,以反透析法分离纳米胶束和游离药物,建立HPLC法测定蛇葡萄素含量。色谱条件:采用Wondasil C₁₈ (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以甲醇-水-磷酸(35:65:0.2)为流动相,流速1.0 mL · min^-1,检测波长292 nm,柱温25 ℃,进样量20 μL。结果:蛇葡萄素质量浓度在10~300 μg · mL^-1 范围内与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 5),回收率为99.3%~101.3%,日内及日间精密度均小于2%。反透析法能将纳米胶束与游离药物良好地分离,游离药物回收率为(99.1±1.7)%,加样回收率为(97.7±1.4)%,平均包封率为(80.4±1.0)%。结论:该法简单易行、结果准确,可用于蛇葡萄素纳米胶束的含量与包封率测定。
代谢分析·生物检定
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  氟代同系物内标在LC-MS/MS法测定人血浆中苯烯莫德浓度的应用

  韦忠娜¹, 赵立波², 王茜², 朱宝英¹, 陈欣², 黄静¹, 方翼²

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 266-272.

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  目的:降低基质效应,建立测定人血浆中苯烯莫德的液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)法。方法:以氟代苯烯莫德为内标,血浆样品用四硼酸钠碱化后,用甲基叔丁基醚(MEBE)萃取,离心后取上清液氮气吹干,流动相复溶后进行LC-MS/MS分析。色谱条件:采用Ultra C₁₈ (50 mm×2.1 mm,5.0 μm)色谱柱,以乙腈-0.2 mmol · L^-1 甲酸铵为流动相,流速300 μL · min^-1,柱温20℃;质谱条件 :电喷雾离子化源(ESI),负离子模式多重反应选择离子检测(MRM),用于定量的离子对分别为苯烯莫德m/z 253.1→210.9和内标氟代苯烯莫德m/z 270.9→229.2。结果:人血浆中苯烯莫德的线性范围为0.1~10 ng · mL^-1 (r>0.99),定量下限为0.1 ng · mL^-1;日内、日间精密度(RSD)均小于15%;相对误差为-1.03%~0.01%;提取回收率大于85%;稳定性良好,血浆基质对苯烯莫德测定无干扰。结论:该方法适用于人血浆中苯烯莫德浓度的测定。氟代同系物内标能部分取代稳定同位素内标,应用在生物样品的检测中。
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  HPLC法测定小鼠血清中的4-甲基-3-硝基苯甲酸及药动学研究

  孟素蕊¹, 焦建杰², 高洋¹, 何景华²

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 273-277.

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  目的: 建立4-甲基-3-硝基苯甲酸(4-methyl-3-nitro-benzoic acid,MNBA)的HPLC测定方法,进行药动学研究。方法:用乙腈直接沉淀蛋白提取样品;采用Intertex C₁₈ 色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm),以磷酸溶液(pH 0.3)-乙腈(50:50)为流动相,流速1.0 mL · min^-1,检测波长230 nm;25 ℃条件下对流动相、血清样品预处理方法进行筛选,并对该方法进行方法学验证。结果:待测物质分离度良好,质量浓度在测定范围内与峰面积线性关系良好(r² ≥0.999 9),方法精密(日内、日间精密度均≤5%)且准确(低、中、高3种质量浓度的准确度均在95%~110%之间),低、中、高3种质量浓度的样品在4℃冰箱保存10 d,-20℃保存20 d及反复冻融3次后均保持稳定无降解。小鼠腹腔注射MNBA后在体内的代谢过程符合开放一房室模型(w=1/c),其药代动力学参数为:T_1/2 分别为(17.0±3.2)h、(30.5±2.7)h和(80.7±2.0)h;AUC_(0-t) 分别为(7 801.8±2 360.7) mg · L^-1 · min^-1、(16 589.1±5 383.6) mg · L^-1 · min^-1 和(56 898.9±12 153.5)mg · L^-1 · min^-1。结论:经方法学验证,本法可作为检测MNBA的测定方法;本文测定的腹腔注射MNBA在小鼠体内的药动学过程为MNBA的后续研究提供参考。
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  中国钩端螺旋体疫苗生产用菌种罗株分子遗传特性分析

  张金龙^1,2, 徐颖华², 王国柱², 张瑾², 张影², 杨英超², 薄淑英², 李晓玲¹, 辛晓芳²

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 278-283.

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  目的: 分析研究中国钩端螺旋体疫苗生产用菌种罗株的分子遗传特性,为钩体疫苗生产用菌种分子遗传质量控制方法的研究奠定基础。方法: 通过对罗株16S rRNA基因片段进行PCR扩增、测序,并运用脉冲场凝胶电泳(PFGE)和多位点序列分析(MLST)等方法,对其进行分子分型。结果: 16S rRNA基因序列比对结果显示钩体疫苗生产用菌种罗株基因种为致病性问号型;PFGE分析结果表明该疫苗株全基因组在酶切后共有100~1 000 kb大小不等的片段11个,与我国其他不同血清群代表株酶切片段的数量、大小和分布特征方面明显不同;多位点序列分析得出该罗株序列型为140。结论: 本文对钩体疫苗生产用菌种罗株的分子遗传信息分析结果,可为后续的钩体疫苗生产用菌种分子遗传质量控制方法的研究提供参考。
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  联合酶联免疫的微量病毒中和法检测大流行流感疫苗血清中和抗体的可行性研究

  赵慧, 李娟, 刘书珍, 邵铭, 江征, 徐康维, 李长贵

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 284-288.

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  目的: 建立联合酶联免疫的微量病毒中和法(ELISA-MVN法),用于大流行流感疫苗流感病毒中和抗体效价的检测,并进行方法学验证。方法: 采用4种羊抗流感病毒血清参考品,与人感染禽流感H5N1病毒疫苗株(A/Vietnam/1194/2004-NIBRG-14)病毒液,分别于37 ℃孵育18 h后,固定细胞,ELISA检测细胞内流感病毒核蛋白表达,确定其中和抗体效价,考察该方法的特异性;通过对高中低不同抗体滴度的血清样本的多次平行检测来评价该方法的重复性;通过ELISA-MVN法和血凝抑制试验(HI试验)分别检测大流行流感疫苗接种者血清样本,比较2种方法的灵敏性和相关性。结果: ELISA-MVN结果显示羊抗H5N1的血清中和抗体检测滴度为5 120,其他3种血清的中和抗体滴度小于10,该方法特异性良好;采用ELISA-MVN法对3种不同滴度的血清进行重复检测,组内重复性试验的6次平行试验结果的RSD为3.5%。组间重复性5次结果,RSD为4.8%~8.6%。2种方法测定疫苗接种者血清样本抗体效价的结果具有显著相关性(P<0.001),相关系数r=0.932。ELISA-MVN法检测结果的几何平均滴度高于HI试验检测结果,该方法较HI试验在检测大流行流感疫苗血清样本灵敏度高。结论: ELISA-MVN可满足大流行流感疫苗血清学检测的要求,并可用于评价大流行流感疫苗的免疫效果。
安全监测
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  10种中药材和3种食品污染赭曲霉毒素A的LC-MS/MS检测研究

  郑润生, 肖启衍, 邱薇, 徐晖, 詹若挺, 陈蔚文

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 289-294.

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  目的: 通过优化液相色谱条件和质谱条件,并结合稀释法克服基质效应的影响,建立适用于10种中药材和3种食品污染赭曲霉毒素A(OTA)的LC-MS/MS检测方法。方法: 样品经84%乙腈提取后,上清液用色谱甲醇复溶(稀释4倍),直接上样检测;流动相采用4.0 mmol · L^-1 醋酸铵-0.1%甲酸水溶液和甲醇,经C₁₈ 色谱柱分离后注入质谱仪,在选择反应监测模式(SRM)下进行正离子检测。结果: 经方法学验证,赭曲霉毒素A质量浓度在25.00~50 000 ng · L^-1 范围内呈现良好的线性关系,r>0.998 7;定量限25.0 ng · L^-1;高、中、低3个浓度水平的绝对回收率89.6%~95.2%,提取回收率84.2%~100.0%;13种样品的基质效应91.5%~118.7%。将该方法应用于实际100批样品的检测,结果显示100批样品中仅有1批的检测结果呈阳性(0.7 μg · kg^-1),表明该地区这些样品中OTA的污染情况不严重。结论: 本研究建立的LC-MS/MS方法具有预处理简便、经济等优点,适用于这10种中药材及3种食品污染赭曲霉毒素A的快速检测。
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  HPLC法测定盐酸头孢他美酯中的有关物质和聚合物

  王建¹, 王丹丹^1,2, 洪利娅¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 295-300.

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  目的: 建立HPLC梯度洗脱法同时测定盐酸头孢他美酯中的有关物质和聚合物。方法: 采用Thermo Acclaim^TM 120 C₁₈ 色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相A为乙腈-甲醇-水-磷酸盐缓冲液(180:47.5:750:67.5),流动相B为乙腈-甲醇-水-磷酸盐缓冲液(540:142.5:250:22.5),梯度洗脱(0 min,0%B;2 min,0%B;30 min,100%B;45 min,100%B;46 min,0%B;55 min,0%B),流速为1.0 mL · min^-1,检测波长为233 nm。结果: 盐酸头孢他美酯与中间体、分解产物完全分离。杂质头孢他美酸、AE活性酯和7-氨基-3-去乙酰氧基头孢烷酸(7-ADCA)的回收率分别为97.8%、98.3%和104.4%,重复性RSD为2.8%,定量限为0.04~0.21 μg · mL^-1。各有关物质测定结果,头孢他美酸为1.0%~1.6%,异构体1为0.2%~0.9%、异构体2为0.1%~0.2%、二聚物1为0.1%~0.3%、二聚物2为0.2%~0.8%。结论: 建立的方法经方法学验证可用于本品的质量控制。
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  法测定左卡尼汀注射液的含量及有关物质

  宋青青^1,2, 张倩¹, 赵云芳¹, 李军¹, 曲昌海¹, 屠鹏飞¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 301-305.

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  目的:建立简便快捷的左卡尼汀注射液含量及有关物质测定方法。方法:采用Alltech^® Brava Amino色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),柱温40 ℃,以0.01 mol·L^-1磷酸盐缓冲液-乙腈(25:75)为流动相,流速1.0 mL·min^-1,检测波长205 nm。结果:左卡尼汀与各有关物质及降解产物色谱峰分离度良好,各杂质峰互不干扰。左卡尼汀、杂质A、杂质B、杂质C、杂质D质量浓度分别在436.2~2 617、3.5~87.4、2.8~56、1.79~44.8、2.54~50.8 μg·mL^-1范围内线性关系良好,平均回收率(n=9)分别为100.0%、100.1%、101.6%、95.7%和102.5%,其定量限(S/N=10)分别为167.50、4.20、22.40、60.48和30.48 ng。结论:方法学验证结果表明,本法可用于左卡尼汀注射液的质量控制。
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  甲啶铂原料药的高效液相色谱分析及其稳定性研究

  陈宏, 栾春芳, 丛艳伟, 张琪, 普绍平, 彭娟

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 306-310.

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  目的: 建立甲啶铂高效液相色谱分析方法,采用该方法测定甲啶铂原料药的纯度,并研究甲啶铂在酸碱、氧化还原环境中的稳定性。方法: 采用Waters XTerraPR C₁₈ (250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱,以15%乙腈水溶液为流动相等度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,二极管阵列检测器(PDA)于200~400 nm内检测含量并分析纯度。在甲啶铂溶液中添加HCl、NaOH、H₂ O₂ 和NaHSO₃,采用高效液相色谱法测定含量,考察甲啶铂在酸碱、氧化还原环境中的稳定性。结果: 此方法可以快速灵敏地测定甲啶铂含量,甲啶铂质量浓度在0.02~0.2 mg · mL^-1 范围内线性相关(R² >0.999 9),检测限和定量限分别为0.094 ng和0.22 ng。此方法可以同时将甲啶铂与顺铂、三氯氨铂酸钾和顺式-二氯-氨、(3-甲基吡啶)合铂(Ⅱ)等杂质有效分离。纯度分析表明,试制的3批甲啶铂原料药纯度高。稳定性试验显示,碱性及氧化环境对甲啶铂具有很强的破坏作用。结论: 此方法可用于甲啶铂原料药及其制备过程中的检测和监控,在甲啶铂原料药保存和制剂研究过程中应避免与碱性和氧化性物质接触。
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  液相色谱-串联质谱法测定策划药物MDPV及其代谢物

  陈学国^1,2, 张婷²

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 311-316.

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  目的: 建立日益流行的策划药物亚甲二氧吡咯戊酮(MDPV)及其体外代谢产物的液相色谱-质谱(LC-MS)联用测定方法。方法: 采用Thermo Gold ODS色谱柱(150 mm×2.1 mm,5 μm),以0.1 mmol · L^-1 醋酸铵-甲酸缓冲溶液(pH 4.5)为流动相A,甲醇为B进行梯度洗脱(0~1 min,10%B;1~6 min,10%B→90%B;6~14 min,90%B),流速0.20 mL · min^-1;采用电喷雾离子化源,正离子检测方式,全离子扫描、选择反应监测扫描模式检测并鉴定MDPV及其代谢产物。结果: 在大鼠肝微粒体S₉ 组分中鉴定得到MDPV的4种体外代谢产物。结论: 所建立的方法用于策划药物及其代谢物的分析,不仅可以节省分析时间、减少实验成本,而且具有高效、灵敏和选择性好等特点。
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  HPLC-MS法分析甲苯磺酸拉帕替尼中痕量基因毒性杂质

  张莉, 黄丽娜, 黎其荣, 杨伟涵

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 317-319.

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  目的: 建立液相色谱-质谱联用方法测定甲苯磺酸拉帕替尼中基因毒性杂质的含量。方法: 采用色谱柱C₁₈ (4.6 mm×250 mm,5 μm),以0.1%甲酸溶液-乙腈(20:80)为流动相,流速1.0 mL · min^-1,电喷雾离子化(ESI)正离子模式下选择m/z 252离子进行检测。结果: 基因毒性杂质4-(3-氟苯甲氧基)-3-氯苯胺质量浓度在0.08~8 ng · mL^-1 范围内,与峰面积线性关系良好(r=1.000);检测限为0.003 6 ng,定量限为0.010 7 ng;样品中基因毒性杂质测定结果的重复性良好,RSD(n= 6)为7.5%;基因毒性杂质平均回收率(n=9)为96.6%。结论: 本方法操作简便,结果可靠,可以用于甲苯磺酸拉帕替尼中基因毒性杂质4-(3-氟苯甲氧基)-3-氯苯胺含量的检测。
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  国产罗红霉素杂质谱及与合成工艺相关性评价

  李文东, 王成刚, 王俊秋

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 320-327.

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  目的: 考察国产罗红霉素的杂质谱情况,并与合成工艺相关性进行初步评价。方法: 采用欧洲药典7.0版罗红霉素有关物质方法对国产样品进行分析,使用Waters Symmetry Shield^TM C₁₈ 色谱柱(150 mm×3.9 mm,5 μm),以0.52 mol · L^-1 磷酸二氢铵溶液[用氢氧化钠溶液(8.5→100)调节pH至4.3]-乙腈(74:26)为流动相A,以水-乙腈(30:70)为流动相B,梯度洗脱(0~50 min,100%A;50~51 min,100%A→90%A;51~80 min,90%A;80~81 min,90%A→100%A;81~100 min,100%A),色谱柱温15 ℃,自动进样器温度8 ℃,检测波长205 nm。以系统适用性对照品对11种已知杂质进行定位,以罗红霉素为外标计算杂质含量。结果: 国产罗红霉素中检出的主要杂质为杂质H、杂质F和杂质C。杂质H是影响国产罗红霉素质量的主要杂质。结论: 国产罗红霉素的主要杂质H和杂质F与合成工艺中起始反应物硫氰酸红霉素中红霉素B和去甲基红霉素的含量相关;杂质C为反应中间体红霉素(E)肟的残留,通过优化纯化工艺可降低杂质C的含量。国产罗红霉素的合成工艺可有效的去除侧链合成中引入的杂质G、杂质J和杂质K。
标准研讨
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  超高效液相色谱-三重四极杆质谱法检测复方阿胶浆中阿胶

  陈佳, 程显隆, 魏锋, 张倩倩, 马双成

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 328-332.

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  目的: 建立复方阿胶浆中阿胶的专属性检测方法。方法: 采用胰蛋白酶对复方阿胶浆中阿胶成分进行酶解,利用超高效液相色谱-三重四极杆质谱(RRLC-QQQ/MS)对阿胶的专属性特征分子离子峰进行检测。采用Agilent SB-C₁₈ (2.1 mm×100 mm,1.8 μm)色谱柱,以0.1%甲酸水溶液为流动相A,以乙腈为流动相B,梯度洗脱(0~25 min,95%A→80%A,5%B→20%B;25~40 min,80%A→50%A,20%B→50%B)。流速0.3 mL · min^-1,柱温40 ℃,进样量5 μL;选择阿胶特征分子离子峰m/z 539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8作为检测离子对,离子化模式为ESI⁺,进行多反应监测。结果: 3批市售样品中均可检出阿胶的特征分子离子峰,即同时检出m/z 539.8(双电荷)→612.4和m/z 539.8(双电荷)→923.8离子对。结论: 所建立的方法经方法学验证,阴性样品及其他胶类如黄明胶、龟甲胶和鹿角胶等对复方阿胶浆样品测定无干扰,样品检出浓度为含5%阿胶的复方阿胶浆样品。方法专属性强,可用于复方阿胶浆中阿胶的检测。
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  离子色谱法检测三磷酸胞苷二钠注射液含量及有关物质

  宗艳平^1,4, 王晓², 张彤³, 卢静华⁴, 山广志¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 333-337.

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  目的: 建立用于三磷酸胞苷二钠注射液含量测定及有关物质检测的离子色谱方法。方法: 采用IonPac^®AS11-HC(4 mm×250 mm)色谱柱,以氢氧化钾为淋洗液,采用梯度洗脱,流速为1.0 mL · min^-1,进样量10 μL,以带DIONEX AERS^®500 4-mm抑制器的电导检测器进行检测,三磷酸胞苷二钠注射液的含量按峰面积以外标法计算,主要降解杂质(二磷酸胞苷二钠、单磷酸胞苷二钠)按加校正因子的主成分自身对照法计算。结果: 三磷酸胞苷二钠在0.000 164~1.60 mg · mL^-1 范围内线性关系良好(r=0.999 8,n=6);平均加样回收率(n=9)为100.1%;三磷酸胞苷二钠对照品溶液在24 h内的稳定性良好(RSD=1.3%);三磷酸胞苷二钠(CTP-Na₂)及主要降解杂质二磷酸胞苷二钠(CDP-Na₂)、单磷酸胞苷二钠(CMP-Na₂)的方法定量限分别为1.6、4.57、6.0 ng,检出限分别为0.50、1.48、1.88 ng。结论: 本方法适用于三磷酸胞苷二钠注射液的质量控制。
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  中药山茱萸炮制前后特征化学成分的分析

  常增荣¹, 李姣², 郝博³, 郭洪祝^1,1, 陈有根¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 338-343.

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  目的: 确定可用于分析和鉴别炮制前山萸肉和炮制后酒萸肉的特征成分。建立HPLC法同时测定山茱萸样品中没食子酸、5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷、当药苷、马钱苷和山茱萸新苷的含量。方法: 采用Phenomenex Gemini C₁₈ 110Å(4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈(A)-0.3%磷酸水(B)为流动相,梯度洗脱(0~20 min,7%A;20~50 min,7%A→20%A;50~65 min,20%A),流速1 mL · min^-1,检测波长240 nm,柱温35 ℃。将15份山萸肉和10份酒萸肉样品中6种化学成分含量测定数据采用SPSS 10.0软件进行组间t检验统计处理。将酒萸肉中含量较高的4种成分进行雷达图分析。结果: 方法学验证结果显示,没食子酸、5-HMF、莫诺苷、当药苷、马钱苷和山茱萸新苷进样量分别在8.174~653.92 μg(r=0.999 5),48.12~3 849.6 μg(r= 0.999 5),44.92~3 593.6 μg(r=1.000 0),9.088~727.042 μg(r=1.000 0),41.36~3 308.8 μg(r=1.000 0)和8.608~688.64 μg(r=0.999 9)范围内与色谱峰面积呈良好的线性关系;平均加样回收率(n=9)均在97.26~103.1%之间,RSD均小于2.8%。样品测定分析结果显示,山萸肉和酒萸肉样品中,除当药苷含量无显著差异外,其余5种成分没食子酸、5-HMF、莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷含量均有显著差异。炮制品酒萸肉中没食子酸、5-HMF含量高于生品山萸肉,但莫诺苷、马钱苷、山茱萸新苷含量低于山萸肉。雷达图分析结果,马钱苷和没食子酸含量呈相对稳定分布,莫诺苷和5-HMF呈 现相反的变化趋势,莫诺苷含量越低,则5-HMF含量越高。结论: 建立的方法符合方法学验证要求。5-HMF和莫诺苷差异显著,可用于鉴别山萸肉和酒萸肉。
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  苗药金铁锁质量标准完善研究

  房楠¹, 吴玟萱¹, 明全忠², 刘勇¹, 王春国¹, 王学勇¹, 石晋丽¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 344-350.

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  目的: 控制金铁锁药材质量,完善2010年版中国药典中金铁锁药材质量标准,优化浸出物测定项,建立显微横切面鉴别和含量测定标准。方法: 采用横切面及粉末显微法、正相分配薄层色谱法进行鉴别;采用中国药典附录方法,对水分、总灰分、浸出物进行测定;采用HPLC法测定酸水解后金铁锁皂皮酸苷元的含量,色谱柱为Zorbax Eclipse Plus C₁₈ (250 mm×4.6 mm,5 μm),流 动相为乙腈-水,梯度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,柱温25 ℃,检测波长210 nm。结果: 金铁锁横切面和粉末的显微特征与文献描述基本一致;薄层色谱斑点清晰,分离好;含量测定皂皮酸进样量在1.049~20.98 μg范围内线性关系良好(r=0.999 9),平均回收率为98.4%(RSD为3.0%,n=6),皂皮酸含量不低于0.10%。结论: 本文优化后的浸出物测定方法以及建立的显微横切面鉴别和含量测定方法可为进一步完善金铁锁药材质量标准提供依据。
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  HPLC法测定杞菊地黄丸中莫诺苷、马钱苷和丹皮酚的含量

  李润泽^1,2, 常增荣², 傅欣彤², 郭洪祝², 张英涛¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 351-354.

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  目的: 建立一种快速、准确和实用的HPLC方法,用于同时测定杞菊地黄丸中莫诺苷、马钱苷和丹皮酚的含量。方法: 采用Phenomenex Gemini C₁₈ (4.6 mm×250 mm,5 μm)色谱柱,以乙腈-0.3%磷酸水溶液为流动相梯度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,柱温40 ℃,检测波长为240 nm(莫诺苷、马钱苷)和274 nm(丹皮酚)。结果: 莫诺苷、马钱苷、丹皮酚质量浓度分别在2.242~44.84 μg · mL^-1 (r=0.999 9)、2.130~42.60 μg · mL^-1 (r=1.000)、5.068~101.4 μg · mL^-1 (r=1.000)范围内,与峰面积线性关系良好;平均回收率分别为96.2%(RSD=0.44%)、96.0%(RSD=0.21%)、103.0%(RSD=0.65%)。结论: 本方法可作为杞菊地黄丸中莫诺苷、马钱苷和丹皮酚含量同时测定的方法,适用于杞菊地黄丸的质量控制。
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  酸水解提取HPLC法测定不同来源莲须中槲皮素和山柰酚的含量

  陈建忠¹, 曾志伟¹, 曾荣洁¹, 吴严斌², 吴锦忠², 吴春敏³, 李彧¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 355-359.

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  目的: 研究莲须的酸水解提取条件及其水解苷元槲皮素和山柰酚的HPLC含量测定方法,并分析不同来源莲须中上述成分的含量差异。方法: 莲须样品经体积分数为25%的盐酸-甲醇溶液(1:4)水解提取后,采用高效液相色谱法测定其水解液中槲皮素和山柰酚的含量。色谱柱为Thermo Scientific Syncronis C₁₈ 柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.012 5%磷酸溶液(60:40),等度洗脱,流速1.0 mL · min^-1,检测波长370 nm,柱温30 ℃。结果: 方法学考察结果表明,槲皮素和山柰酚进样量分别在0.013 99~0.279 8 μg(r=0.999 9)和0.028 70~0.574 2 μg(r=0.999 9)范围内与其对应的峰面积线性关系良好;它们的低、中、高3个加入水平的平均回收率(n=3)分别为102.4%(RSD=1.9%)和100.1%(RSD=1.7%)、101.2%(RSD=0.87%)和96.0%(RSD=0.18%)、101.8%(RSD=1.7%)和95.5%(RSD=1.6%)。15批不同来源的莲须样品中槲皮素和山柰酚含量差异较大,分别为0.07~0.76 mg · g^-1 和0.24~2.40 mg · g^-1。其中1号样品(福建福州1)中槲皮素和山柰酚的含量最高,而14号样品(福建永春)中槲皮素和山柰酚的含量最低。结论: 酸水解提取HPLC法可用于莲须药材中槲皮素和山柰酚含量的测定;15批不同来源莲须的含量测定结果为进一步修订莲须的质量标准提供了实验依据。
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  甘松新酮的稳定性研究

  刘国林, 刘勇, 石晋丽, 房楠, 李健, 吕跃伟, 吴玟萱

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 360-363.

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  目的: 考察甘松新酮及其溶液的稳定性,为对照品研制提供参考。方法: 将甘松新酮固体放置高温、高湿以及光照条件下10 d,分别于第5天和第10天用HPLC法测定其含量变化;在室温下将甘松新酮乙醇溶液分别用氢氧化钠溶液或盐酸调节pH至设定值,放置72 h,考察pH对其醇溶液稳定性的影响;采用经典恒温法预测甘松新酮醇溶液在室温下和4 ℃条件下的稳定性。结果: 甘松新酮固体在高温(60 ℃)以及高湿条件下稳定,在10 d内光照条件下降解到92.19%;甘松新酮乙醇溶液在碱性环境下基本稳定,在酸性以及高温环境中则迅速降解,且温度越高,降解速率越快;甘松新酮醇溶液在室温下的有效期(t₉₀)为73.18 h,4 ℃下为1 621.22 h。结论: 甘松新酮对光以及高温敏感,应避光保存;在提取分离以及给药过程中应注意控制温度低于40 ℃以及溶液pH在7~12范围内。
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  复方磺胺甲(口恶)唑片均匀性的相关因素分析

  董艳虹¹, 吴阮琦¹, 秦少容², 蒲道俊², 范琦¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 364-369.

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  目的:分析复方磺胺甲(口恶)唑片批内、批间及厂间均匀性的主要相关因素,为该片均匀性生产过程控制方案的制订提供依据。方法:采用高效液相色谱仪、分析天平、片剂硬度仪和游标卡尺分别测定复方磺胺甲(口恶)唑片4个厂家13批共258片样品的磺胺甲(口恶)唑(SMZ)含量、甲氧苄啶(TMP)含量、片重(TW)和片抗张强度(TRTS),结合近红外光谱、采用方差分析法分析以上相关因素对复方磺胺甲(口恶)唑片批内、批间及厂间均匀性的影响。结果:复方磺胺甲(口恶)唑片批内均匀性的主要相关因素各厂不同,厂A为TW(变异为0.772×10^-5~3.22×10^-5 g²),厂B为SMZ含量[变异为19.3×10^-5~34.4×10^-5(g·g^-1)²]及TMP含量[变异为0.623×10^-5~1.27×10^-5(g·g^-1)²],厂C为TW(变异为6.48×10^-5~24.3×10^-5 g²);批间均匀性的主要相关因素为TW(变异为0.121×10^-5~10.3×10^-5 g²);厂间均匀性的主要相关因素为TW(变异为13.9×10^-5 g²)及SMZ含量[变异为13.2×10^-5(g·g^-1)²]。结论:本研究证明SMZ含量、TMP含量、TW和TRTS均是复方磺胺甲(口恶)唑片均匀性的相关因素。在制订该片均匀性生产过程控制方案时,应控制各厂的主要相关因素以提高批内均匀性:主要控制TW变异以提高批间均匀性,控制TW及SMZ含量的变异以提高厂间均匀性。本研究也为其他片剂的均匀性研究与控制提供了参考。
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  广防风基原与鉴别

  刘文啟¹, 严华¹, 董亚娟², 魏锋¹, 马双成¹

  药物分析杂志. 2015, 35(2): 370-376.

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  目的: 建立广防风形态学及理化鉴别方法,完善质量标准。方法: 考证广防风文献,应用植物分类学、药材鉴定学及薄层色谱的方法对广防风生药学鉴别特征观察记述,对不同产地广防风根及地上部位化学特征比对研究。结果: 广防风本草考证表明古今广防风为唇形科植物广防风Epimeredi indica(L.)Rothm.干燥全草。本文提供广防风植物形态,根和茎叶性状特征,提供其组织横切面及粉末的特征,同时提供广防风地上与地下部位成分定性分析结果。结论: 研究结果可为广防风的鉴别、质量标准制订及合理开发利用提供依据。